[发明专利]用于提供唾液酸化寡糖的方法

权利要求书

1.用于提供包含含有唾液酸之寡糖的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供含有至少两个末端结合的β-连接半乳糖残基的不可消化的低聚半乳糖(GOS)源；

b)提供具有(α2-3)-唾液酸化O-聚糖的唾液酸供体；

c)在酶反应混合物中，在具有转唾液酸酶活性之酶的存在下，使所述GOS与所述唾液酸供体接触；以及

d)从所述酶反应混合物获得级分，其包含基于干物质按重量计至少5％的双唾液酸化低聚半乳糖(双-Sia-GOS)。

2.根据权利要求1的方法，其中所述低聚半乳糖源通过用β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)对乳糖或者乳糖与海藻糖的混合物进行酶处理来获得。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述双-Sia-GOS的聚合度(DP)为DP4至DP10、优选DP5至DP8。

4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述唾液酸供体是天然存在的化合物，优选选自与寡糖结合的唾液酸、多糖、多聚唾液酸、糖蛋白和糖脂。

5.根据权利要求4的方法，其中所述唾液酸供体选自糖基化的乳清蛋白和酪蛋白，及其片段，优选来自κ-酪蛋白的糖巨肽(GMP)。

6.根据权利要求4的方法，其中所述唾液酸供体选自糖基化的黏液蛋白质及其片段，优选猪小肠糖蛋白(PSMG)。

7.根据权利要求6的方法，其中所述唾液酸供体从黏蛋白获得，任选地在随后浓缩含有Sia的黏蛋白多聚体后获得。

8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述具有转唾液酸酶活性之酶由来自锥虫(Trypanosoma)属之微生物，优选克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)或刚果锥虫(Trypanosoma congolense)的基因产物编码。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述酶是重组产生的。

10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述酶反应混合物的pH为4至6，优选4.8至5.8。

11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述步骤d)包括基于待分离组分之间电荷差异的分离技术，优选阴离子交换色谱。

12.根据权利要求1至11中任一项的方法，其中所述步骤d)包括基于待分离组分之间尺寸差异的分离技术，优选尺寸排阻色谱。

13.组合物，其包含按重量计至少5％的可通过根据权利要求1-12中任一项所述的方法获得的双唾液酸化低聚半乳糖。

14.根据权利要求13的组合物，其包含至少7wt％，优选至少10wt％的双唾液酸化低聚半乳糖。