[发明专利]N-羟基琥珀酰亚胺用于改善缀合物的稳定性的用途

说明书

交叉参考相关申请

本专利申请要求2011年12月13提交的美国临时专利申请No.61/570,139的利益，将所述美国临时专利申请通过引用并入本文。

发明背景

对癌症和其它疾病的治疗是有用的抗体-药物缀合物通常由三个不同的元件组成：细胞结合剂、接头和细胞毒素剂。常用制剂方法之一包括修饰步骤，其中将细胞结合剂与双官能接头反应以形成共价地连接于具有反应性基团的接头的细胞结合剂；纯化步骤，其中将修饰抗体从修饰反应的组分纯化出来；缀合步骤，其中将修饰细胞结合剂与细胞毒素剂反应以从接头(使用反应性基团)至细胞毒素剂形成共价化学价；和第二纯化步骤，其中将缀合物从缀合反应的其它组分纯化出来。

尽管在制备抗体-药物缀合物上取得了进展，但目前的方法受到几个因素限制。例如，双官能交联剂对抗体的结合在本领域中目前使用的条件下是异质的，这导致包含稳定的酰胺键和不稳定的酯键的缀合物。据认为缀合物中不稳定酯键的存在导致药物从缀合物释放和缀合物的不稳定性。

最近的临床试验已显示抗体-药物缀合物在治疗许多不同类型的癌症中的有前景的作用。因此，存在对改进的制备更稳定的并且比由目前的方法产生的抗体-药物缀合物更纯的抗体-药物缀合物的方法的需要。本发明提供了这样的方法。本发明的这些和其它有利方面以及另外的发明特征根据本文中提供的本发明的描述将变得显然。

发明概述

本发明提供了用于在外源N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)存在的情况下制造具有改善的稳定性的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法。

发明详述

本领域技术人员将理解，包含化学地偶联于细胞毒素剂的抗体的缀合物(“抗体-细胞毒素剂缀合物”)通常如下进行制备：利用双官能交联试剂(通常利用交联试剂上的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应基团)修饰抗体，纯化具有连接于其的接头的抗体，将细胞毒素剂缀合于具有连接于其的接头的抗体，和纯化抗体-细胞毒素剂缀合物。本发明通过使稳定地键合于细胞结合剂的接头的量减少至最少和使导致缀合物不稳定性的不期望的副反应降至最低来改进这样的方法。

作为双官能接头(例如，SPP、SPDB、SMCC)的水解/氨解的结果，在修饰反应过程中产生少量NHS。NHS目前被本领域技术人员当作修饰反应的不期望的(或至少中性)副产物。因此，目前的方法通常包括在添加细胞毒素剂之前纯化修饰抗体，这导致在缀合反应之前NHS的除去。

令人惊讶地发现，在外源NHS存在的情况下制备抗体-细胞毒素剂缀合物导致缀合物的稳定性的显著增加，如通过游离类美登素的释放测量的。因此，本发明提供了用于在外源NHS存在的情况下制造具有改善的稳定性的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法。

本发明提供了用于制备细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括添加外源NHS。如本文中所用，“外源NHS”是指在方法过程中从外部来源添加的NHS，并且不是指在修饰反应过程中作为双官能接头的水解/氨解的结果产生的NHS。