[发明专利]用于室温原位检测生物样品中的目标核酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种检测生物样品中的目标核酸的方法，包括步骤：

a)在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下用包含蛋白酶的溶液预处理包含所述目标核酸的生物样品；

b)使所述样品变性；

c)使至少一个探针与所述样品中的目标核酸杂交，其中所述探针包含与所述目标核酸中的核苷酸序列基本上互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记；

d)洗涤所述样品，以去除未与所述目标核酸杂交的探针；和

e)检测与所述目标核酸杂交后的寡核苷酸探针上的所述至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸。

2.权利要求1所述的方法，其中a)中的所述溶液包含约0.1％至约0.3％的胃蛋白酶。

3.权利要求1或2所述的方法，其中a)中的所述溶液具有酸性pH。

4.权利要求3所述的方法，其中a)中的所述溶液包含0.01N HCl。

5.权利要求1、2或3所述的方法，其中使所述样品与a)中的所述溶液接触约5至约20分钟。

6.权利要求5所述的方法，其中使所述样品与a)中的所述溶液接触约15分钟。

7.权利要求1-6任一项所述的方法，其中步骤b)-d)的一个或多个在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下进行。

8.权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述探针为包含约20至约50个核苷酸的单链寡核苷酸探针。

9.权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述探针由基因组片段制备。

10.权利要求1-9所述的方法，其中所述生物样品包含上皮细胞、皮肤细胞、骨髓细胞、分裂球、精细胞、卵母细胞或极体，或它们的组合。

11.一种检测生物样品中的目标核酸的方法，包括步骤：

a)在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下，使至少一个探针与所述样品中的目标核酸杂交，其中所述探针：

1)存在于包含约1-10mM碱且pH为约10至约13的杂交缓冲液中，和

2)包含与所述目标核酸中的核苷酸序列基本上互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记；

b)洗涤所述样品，以去除未与所述目标核酸杂交的探针；和

c)检测与所述样品中的目标核酸杂交后的所述探针上的所述至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸。

12.权利要求11所述的方法，其中所述杂交缓冲液的pH为约11至约12。

13.权利要求11或12所述的方法，其中所述杂交缓冲液包含约1-5mM碱、约20-60％甲酰胺和约5-40％硫酸葡聚糖。

14.权利要求11、12或13所述的方法，其中所述碱为NaOH。

15.权利要求14所述的方法，其中所述杂交缓冲液包含约1.0-3.0mM NaOH、约30-50％甲酰胺和约10％硫酸葡聚糖。

16.权利要求14所述的方法，其中所述杂交缓冲液包含约4.2mM NaOH、约42％甲酰胺和约28％硫酸葡聚糖。

17.权利要求11-16任一项所述的方法，其中步骤a)的持续时间为约5分钟至约15分钟。

18.权利要求11-17任一项所述的方法，其中所述探针为包含约20至约50个核苷酸的单链寡核苷酸探针。

19.权利要求11-17任一项所述的方法，其中所述探针由基因组片段制备。

20.权利要求11-19任一项所述的方法，其中所述生物样品包含上皮细胞、皮肤细胞、骨髓细胞、分裂球、精细胞、卵母细胞或极体，或它们的组合。

21.权利要求11-20任一项所述的方法，其中步骤b)在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下进行。