[发明专利]表皮生长因子受体（EGFR）与蛋白酶活化受体2（PAR2）对肠道通透性的调节

说明书

相关申请的交叉参考

根据美国法典第35卷第120节(35 U.S.C.§120)，本国际申请案要求享有待决的美国第13/323,100号部分继续申请案的优先权，而且上述专利申请案的全部内容以引用的方式合并于此。

联邦政府资助说明

本发明获美国国立卫生研究院(National Institute of Health)授予基金(基金授予号DK048373)，在政府的支持下完成。政府对本发明具有某些权利。

发明背景

技术领域

本发明涉及细胞生物学及肠道通透性(IP)领域。更为明确地说，本发明涉及表皮生长因子受体(EGFR)与蛋白酶活化受体2(PAR₂)对肠道通透性的调节。

相关技术的描述

卫生水平提高导致人们减少与各种微生物接触的情况被认为是过去三四十年期间在工业化国家中有记录的过敏性疾病、炎性疾病及自身免疫性疾病等“流行病”的导因之一(1)。除了基因构成及暴露于环境诱发因素之外，一第三类关键因素(即增加的肠道通透性)已经被提议为这些疾病的发病机理(2-4)。

肠道通透性与肠上皮细胞及内腔树突状细胞进行的抗原摄取共同调节肠腔与黏膜下层之间的分子运输，导致对非自体抗原的耐受或免疫(5)。然而，细胞旁空间的尺寸(至)表明分子半径大于(分子量约3.5kDa)(包括蛋白质)的溶解物通常被排阻在这种摄取途径之外。所述细胞间紧密接界严密地调节这种细胞旁抗原运输。

紧密接界是在生理和病理环境下都对肠上皮的几种重要功能有操控作用的动态结构(3)。然而，尽管人们对细胞间紧密接界的组成及功能的了解有了重大进展，但对其调控机理尚未完全清楚。

一种能够增加紧密接界通透性的毒素-霍乱弧菌封闭带毒素(Vibrio cholerae zonula occludens toxin,Zot)的发现，导致对其真核细胞对应物-连蛋白(zonulin)的确认。连蛋白(zonulin)是已知的唯一能够通过调节细胞间紧密接界来可逆地调控肠道通透性的一种生理调节物(6，7)。人类连蛋白(zonulin)是一种分子量约为47kDa的蛋白，其能够增加非人灵长类动物肠上皮的肠道通透性(7)、参与肠道先天免疫(8)、并在以紧密接界功能障碍为主的自身免疫紊乱疾病-包括乳糜泻症(9，10)及1型糖尿病(11)等疾病中过度表达。

触珠蛋白(Hp)是一种急性时相反应蛋白，主要在肝脏、动脉壁、子宫内膜和腹膜中合成。触珠蛋白的核心功能是作为血红蛋白(Hb)的结合蛋白，参与大部分在肝脏网状内皮系统中的游离血红蛋白的终末处理及清除。该系统使血红蛋白基团中存在的铁得以保持。

触珠蛋白具有由多个二硫键连接的两条α链及两条β链组成的四聚体结构。β链(245个氨基酸)的分子量约为40kDa(其中约30％w/w为碳水化合物)，而且为所有表型所共有。α链以两种形式存在：α-1(83个氨基酸，9kDa)及α-2(142个氨基酸，17.3kDa)，因此触珠蛋白以三种表型出现，这三种表型称为Hp1-1、Hp2-1及Hp2-2。Hp1-1包含两条α-1链，Hp2-2包含两条α-2链，而Hp2-1包含一条α-1链和一条α-2链。Hp1-1的分子量为100kDa，在与血红蛋白复合时其分子量为165kDa。Hp1-1以单一异构体存在，也被称为触珠蛋白二聚物。Hp2-1的平均分子量为220kDa，形成多个线型聚合物。Hp2-2的平均分子量为400kDa，形成多种环状聚合物。每种不同的聚合物形态均为一不同的异构体。

触珠蛋白是一种潜在的可用于治疗溶血造成的肾紊乱的手段。其具有在治疗上作为一种清除游离血红蛋白的手段的潜能。这样形成的复合物还具有潜在的抗炎剂、抗氧化剂及血管生成剂的作用。然而，触珠蛋白被认为难于在保持其生物活性的同时进行大规模分离。

本领域对触珠蛋白2前体的功能性描述以及调节肠道通透性的方法，有着公认的需求。本发明将满足这个存在已久的需求。

发明内容