[发明专利]用于使用酶法对糖化血红蛋白进行定量分析的溶血试剂组合物

权利要求书

1.一种溶血试剂组合物，所述组合物用于通过酶法对糖化血红蛋白进行定量分析的预处理过程中，所述组合物包含由下述化学式1表示的两性离子表面活性剂以及亚硝酸化合物：

[化学式1]

其中，R¹和R²分别独立地表示直链或支链C_1-5烷基；

n为1至6的整数；

X为单键或

其中，当X为时，m为1至3的整数，R³为直链或支链C₁₃烷基；而当X为单键时，m为1，R³为直链或支链C₁₃烷基。

2.如权利要求1所述的溶血试剂组合物，其中，R¹和R²分别独立地表示直链或支链C_1-3烷基；

n为1至4的整数；

X为单键或

其中，当X为时，m为1至3的整数，R³为直链或支链C₁₃烷基；当X为单键时，m为1，R³为直链或支链C₁₃烷基。

3.如权利要求1所述的溶血试剂组合物，其中，所述由化学式1表示的两性离子表面活性剂为：

3-(二甲基(3-十四烷酰胺基丙基)铵基)丙烷-1-磺酸盐、

4-(二甲基(3-十四烷酰胺基丙基)铵基)丁烷-1-磺酸盐、或

3-(二甲基(十四烷基)铵基)丙烷-1-磺酸盐。

4.如权利要求1所述的溶血试剂组合物，其中，所述亚硝酸化合物为选自于由亚硝酸钠、亚硝酸钾、亚硝酸镁和亚硝酸钙所组成的组中的至少一种。

5.一种用于糖化血红蛋白定量分析的方法，所述方法包括：

步骤1：使用权利要求1所述的溶血试剂组合物引起红细胞溶血；

步骤2：测定通过所述步骤1中的红细胞溶血释放的血红蛋白的总量；

步骤3：通过使用蛋白酶选择性地仅切除经所述步骤1中的红细胞溶血释放的糖化血红蛋白β链N端的‘糖-Val-His-’部分，得到单体的果糖基氨基酸；

步骤4：通过使果糖基肽氧化酶(FPOX)与所述步骤3中得到的果糖基氨基酸进行反应，产生过氧化氢；

步骤5：通过与过氧化物酶(POD)进行反应，氧化所述步骤4中产生的过氧化氢；

步骤6：测定由所述步骤5中氧化的过氧化氢与底物的氧化还原反应引起的显色量；以及

步骤7：通过比较所述步骤2中测定的所述血红蛋白的总量与所述步骤6中的糖化血红蛋白的量，对血液样品中的糖化血红蛋白浓度进行定量。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述蛋白酶为选自于由以下蛋白酶所组成的组中的至少一种：所述蛋白酶来源于芽孢杆菌属、曲霉属、链霉菌属、以及它们的遗传重组体。

7.如权利要求5所述的方法，其中，对所述步骤2中的血红蛋白的总量和所述步骤6中的糖化血红蛋白的量进行光学测定。

8.如权利要求5所述的方法，其中，所述由化学式1表示的两性离子表面活性剂加快了红细胞的溶血速率，并改善了酶活性。

9.如权利要求5所述的方法，其中，所述亚硝酸化合物通过柔化血红蛋白的蛋白质结构而改善蛋白酶活性。