[发明专利]生产自然杀伤细胞的方法、由该方法生产的自然杀伤细胞以及包含该自然杀伤细胞的用于治疗癌症和感染性疾病的组合物

说明书

本发明涉及一种生产自然杀伤细胞(下文中，简称“NK细胞”)的方法、由该方法生产的NK细胞以及包含该NK细胞的用于治疗癌症和感染性疾病的组合物。本发明提供一种生产NK细胞的方法，该NK细胞保持高细胞活性和细胞毒性而对癌症和感染性疾病展现高疗效，并且能够以高效率和高浓度在活体外培养。此外，将一种保持细胞浓度处于恒定水平的培养方法用于生产NK细胞，从而可防止细胞的过度生长，这样可使细胞保持在最佳状态。特别地，即使当细胞被冷冻之后解冻时，细胞的功能也不会受损，并且NK细胞可保持高细胞活性和细胞毒性。因此，能够以液体状态或冷冻状态容易地存储和提供NK细胞，而无需额外的处理过程。

技术领域

本发明涉及一种生产自然杀伤细胞(在下文中简称为“NK细胞”)的方法、由该方法生产的NK细胞以及包含该NK细胞的用于治疗癌症和感染性疾病的组合物。

背景技术

针对癌症治疗，已开发并采用了包括手术、放疗和化疗的多种治疗方法。然而，在特定的癌症和患者的情况下，难以应用这些治疗方法而且复发的可能性很大。

因此，利用患者的免疫功能的免疫疗法日益受到关注，该免疫疗法基于通过具有各种功能的免疫细胞之间的复杂的相互作用来去除肿瘤。直接去除癌细胞的免疫细胞包括NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，将抗原呈递至这些效应细胞的免疫细胞包括树突细胞(DC)或B细胞。其他实例包括分泌各种细胞因子的辅助性T细胞(Th细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)等。在这些免疫细胞中，NK细胞被认为是最快速起效且高效的免疫细胞。

NK细胞是占血细胞的约10％的淋巴细胞且在免疫应答中起重要作用。NK细胞具有多种功能，特别是具有杀死癌细胞或感染了外部病原菌的细胞的能力，因此NK细胞的功能是去除癌细胞或去除将发展成癌症的细胞。

大多数NK细胞在机体中通常以灭活状态存在，但是为了将NK细胞用于治疗目的，需要活化NK细胞。因此，已积极进行了各种研究来活化来自患者的正常血液或灭活血液的NK细胞。

通过在活体外活化NK细胞获得的NK细胞的高细胞毒性表明了将NK细胞用于免疫细胞疗法的可能性。据报道，在异基因骨髓移植之后施用在活体外活化的NK细胞时，对多种癌症具有治疗作用，特别是诸如白血病的血癌(Blood Cells Molecules&Disease,33:p261-266,2004)。然而，临床上尚未证明NK细胞对除了血癌以外的实体癌的明显治疗效果。具体地，据报道，在癌形成之前施用NK细胞可干扰癌植入(Cancer Immunol.Immunother.,56(11):p1733-1742,2007)，但是这种治疗模式似乎并不合适。此外，据报道，在动物试验中腹腔注射NK细胞抑制乳腺细胞的生长，但尚不清楚该抑制效果是否可归因于NK细胞(Breast Cancer Res.Treatment,104(3):p267-275,2007)。

同时，尽管NK细胞可能作为癌症或感染性疾病的治疗剂，但是体内存在的NK细胞数量并不多，因而需要一种生产大量的NK细胞同时保持足以用于治疗目的疗效的技术。然而，NK细胞在体外不能被充分培养和扩增。因此，能在有用的水平上培养和扩增NK细胞的技术已受到关注，但是研究结果尚不能在临床上应用。

不仅利用用于T细胞增殖/活性的IL-2，而且利用IL-15(J.Immunol.,167(6):p3129-3138,2001；Blood,106(1):p158-166,2005,KR2009-0121694A)、刺激CD3的OKT-3抗体(Experimental Hematol.,29(1):p104-113,2001)和LPS(J.Immunol.,165(1):p139-147,2000)对NK细胞的培养已进行了各种研究。然而，这些研究仅仅发现了对IL-2应用的修饰以及新型增殖物，并未提出用于增殖的具有划时代意义的方法。众所周知，当使用IL-2或其他细胞因子或化学物质来培养NK细胞时，NK细胞的数量比NK细胞的初始数量仅增加了约3-10倍。