[发明专利]骨保护素衍生的组合物及其用途

说明书

技术领域

本发明大体上涉及生物制药领域以及在与骨吸收关联的情况中——例如在肿瘤学中——的生物制药的用途。更具体地，本发明涉及结合核因子kB受体活化因子配体(RANKL)的骨保护素衍生的组合物。

背景技术

在本节中描述的方法可被实行，并且不一定是先前已经构思或实行的方法。因此，除非另有说明，不应假设在本节中描述的任何方法，仅仅因为它们包含在本节中而将其作为现有技术。

人类的骨保护素(OPG；基因库：U94332.1)是401个氨基酸的蛋白质，其包含21个氨基酸的信号肽，其在谷氨酸22产生380个氨基酸的成熟的可溶性蛋白质之前被分开。OPG是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族的一员，在其N-末端部分中包含四个富含半胱氨酸TNFR样结构域。OPG已经显示出在骨发展中发挥作用，并且缺少OPG基因的小鼠具有骨质疏松的表型和肉眼可见的骨骼异常。

OPG——其由成骨细胞和骨髓基质细胞产生——充当没有明显的直接信号功能的分泌诱饵受体。OPG通过结合其自然的配体——骨保护素配体(OPGL)起作用，其也被称为RANKL(核因子kB受体活化因子配体)。OPG和RANKL之间的结合阻止了RANKL激活其同源受体RANK，RANK是对于破骨细胞分化、活化和存活至关重要的破骨细胞受体。

重组体OPG以分别大约55kDa和110kDa的表观分子量的单体和二聚体的形式存在。N-末端结构域至半胱氨酸残基185的截断可能通过破坏TNFR样结构域的二硫键导致OPG失活，而蛋白质的C-末端部分至残基194的截断不改变生物活性。

在转基因小鼠中的OPG的超表达导致以小鼠中的破骨细胞几乎完全缺乏为特征的严重的骨硬化病。相反地，OPG基因的消融导致在小鼠中严重的骨质疏松，这显示了OPG在调节骨吸收中的重要的生理作用。来自于成骨细胞和基质细胞的OPG和RANKL的分泌物由多个激素和细胞因子进行调节。OPG和RANKL产量的相对水平被认为是用于控制骨吸收的程度：RANKL的表达增加骨吸收，而过量的OPG具有相反的效果。重组体OPG阻碍体外和体内的刺激破骨细胞的绝大部分因素的影响。OPG也抑制多种动物疾病模型——包括卵巢切除术、诱发型骨质疏松、恶性体液性高钙血症以及实验性骨转移——中的骨吸收。因此，OPG可代表针对与过度的破骨细胞活动关联的疾病的有效的治疗选择(Kostenuik PJ，Shalhoub V.，发表在当今制药(Curr Pharm Des.)2001年5月版；7(8)：613-35)。

狄诺塞麦(Denosumab)是高亲和力的完全人单克隆抗体，其结合了人的RANKL并抑制其与RANK相互作用，因此具有类似于OPG的作用方式。针对绝经后妇女骨质疏松的预防和治疗，美国食品和药物管理局(FDA)批准了商品名为普罗利亚(Prolia)的狄诺塞麦。针对具有来自于实体瘤的骨转移的患者的骨骼相关事件的预防，美国食品和药物管理局(FDA)批准了商品名为Xgeva的狄诺塞麦。针对其它骨重塑的相关情况的狄诺塞麦的进一步的临床试验目前正在进行，即，针对来自于癌症的其它形式的骨转移。

因此，人们希望有一种治疗组合物，其能够与RANKL结合并基于自然出现的OPG分子，当具有可接受的药理学特性时，其具有更广泛的治疗潜力。

发明内容

提供本发明内容用于以简化形式介绍以下在具体实施方式中进一步说明的所选构思。本内容不旨在确定所要求保护的主题的关键特征或必要特征，也不旨在被用作确定所要求保护的主题的范围的辅助。

在某些方面，本发明提供一种结合了人的RANKL的多肽。该多肽包含第一氨基酸序列，该第一氨基酸序列包含人骨保护素的氨基酸1至215(基因库：U94332.1)。该多肽进一步包含第二氨基酸序列，该第二氨基酸序列包含人免疫球蛋白γ-1Fc的氨基酸103至329(基因库：J00228.1)。该多肽在具有在100ng/ml的浓度时约50ng/ml或不超过10％的半数有效浓度(EC50)的体外基于细胞的测定中能够抑制RANKL诱导的破骨细胞分化。该多肽可包含SEQ ID NO.1的氨基酸序列。