[发明专利]来自鱼孵化液的化妆品组合物

权利要求书

1.从鲑鱼孵化液制备化妆品组合物的方法，其包括至少下述步骤：

a)将鲑鱼卵悬浮在最小体积的水中；

b)诱导所述卵的同步快速孵化，使得对于多于95％的胚胎在小于2小时内完成孵化；

c)任选地过滤孵化的卵，以获得孵化液；和

d)过滤b)或c)的孵化液，以获得组合物，其中过滤孵化液的步骤包括至少下述步骤：

(i)使用孔径大小为7μm的过滤器过滤孵化液和收集滤液；

(ii)使来自步骤(i)的滤液进行离子交换层析，包括：

(1)将滤液加载至DEAE(二乙氨乙基)柱离子交换柱；

(2)用pH为8.5的20mM Tris HCl缓冲洗液冲洗柱；

(3)从柱使用第一洗脱缓冲液洗脱白细胞凝集素多肽，所述第一洗脱缓冲液包括缓冲洗液，其包括浓度为50mM的NaCl；

(4)从柱使用第二洗脱缓冲液洗脱剩余多肽，所述第二洗脱缓冲液包括缓冲洗液，其包括浓度为1M的NaCl；

(5)从步骤(4)收集洗脱液；

e)通过使用具有8kDa的排阻尺寸的过滤器进行渗滤，用美容可接受的缓冲液交换来自步骤(5)的洗脱液中的水；

f)使用孔径大小为0.22μm的过滤器过滤获得自步骤(e)的溶液和收集滤液；和

g)从来自步骤(f)的滤液制备所述化妆品组合物，其中，所述组合物包括金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和一个或多个蛋壳多肽和/或所述多肽的部分。

2.权利要求1所述的方法，包括使用孔径大小为0.30-0.60μm的过滤器过滤来自步骤(i)的滤液的另外步骤和收集滤液。

3.权利要求2所述的方法，其中所述过滤器的孔径大小是0.35-0.55μm。

4.权利要求3所述的方法，其中所述过滤器的孔径大小是0.45μm。

5.权利要求1所述的方法，其中各多肽在所述组合物中以所述组合物中总多肽质量百分数计的比例为：

(i)0.05％至0.20％的金属蛋白酶；

(ii)0.15％至0.40％的丝氨酸蛋白酶；和

(iii)99.40％至99.80％的总蛋壳多肽或所述多肽部分。

6.权利要求5所述的方法，其中所述金属蛋白酶在所述组合物中的比例为0.100％至0.125％。

7.权利要求5所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶在所述组合物中的比例为0.255％至0.310％。

8.权利要求5所述的方法，其中所述总蛋壳多肽或所述多肽部分在所述组合物中的比例为99.575％至99.645％。

9.权利要求1-8任一项所述的方法，其中所述步骤e)中，所述缓冲液：(I)为磷酸缓冲生理盐水，(II)包含0.5mM磷酸和1mM NaCl，或(III)包含10mM Tris，所述Tris的pH为7.5-8.5且包含5mM NaCl。