[发明专利]一种重组蛛丝蛋白/银纳米生物创面膜的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及到一种应用于损伤皮肤修复再生的生物创面膜，尤其涉及一种重组蛛丝蛋白/含银纳米创面膜的制备方法。

背景技术

皮肤损伤的治疗，不仅需要促进皮肤愈合，而且需要注意杀菌，防止感染。对于在机体修复功能良好的情况下的小范围急性损伤，传统的以被动的简单覆盖来保护伤口是奏效的。但是，对慢性、大范围或长期反复感染、机体修复功能异常的患者，就必须采取积极主动的有效措施，才能尽快康复。

传统的创伤涂膜剂或创伤覆盖材料，大多有医院自制，如创伤涂抹剂，一般由主药、成膜材料、增塑剂、透皮吸收促进剂、防腐剂和溶媒材料构成，对迅速止痛、抗感染和创面保护具有一定的作用，但自制过程药物的用量不好控制，且透气性能差，而创伤覆盖材料存在粘连等诸多问题。生物创面膜是用预制的生物活性材料覆盖创伤表面，起到皮肤屏障作用，为创面愈合提供有利的微环境，从而促进皮肤细胞增生，加快皮肤损伤愈合的一类医疗器械材料。

在创面的治疗中，抗感染很重要。自第二次世界大战以来，抗生素广泛应用于创伤治疗，但是长期使用抗生素使得细菌产生了耐药性。细菌对抗生素的抗性是伤口治疗面临的主要问题之一。而且，传统的创面膜仅能起到覆盖伤口表面的作用，在一定程度上能降低感染，但是皮肤愈合速度较慢，抗菌性能不强。

银离子具有良好的抗菌性，目前还没有文献报道有对银离子产生抗性的细菌。因此，将银离子引进创面膜能够克服使用抗生素抗感染的缺点。

作为创面膜，我们希望它具有较好的生物降解性和良好的组织相容性，福建师范大学的李敏教授等根据蜘蛛丝的结构和功能特性，应用基因工程技术，大规模获得RGD-蛛丝蛋白，由于蛛丝蛋白形成的纤维是一种具有高抗张强度和高弹性的蛋白纤维，具有较好的生物降解性、优越的力学性能和良好的组织相容性，当之无愧的成为了创面膜首选材料，用RGD-蛛丝蛋白制备的创面膜还具有细胞粘附功能，目前尚未见到将RGD-蛛丝蛋白用于制备创面膜的工艺技术报道。具体详见2004年发表于《生物医学工程学杂志》（李敏，黄建坤，涂桂云等, RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因的构建、表达与纯化,）2004, 21(6):1006。

静电纺丝技术是指通过应用高电压将聚合物微小射流在运行过程中固化成纤维，它是一种简单成本低廉的制造超细直径的纤维技术，应用静电纺丝技术而制造的纤维被广泛研究。电纺技术快速高效，容易操作，制备的纤维具有较高的表面积体积比，孔径较小，孔隙较多，适合于多孔材料的制备。

聚乙烯醇（PVA）作为一种合成高分子材料，合成方便、安全低毒、力学强度较佳、价格便宜、使用方便，在生物医学领域也得到广泛的应用。

因此，应用静电纺丝技术，构建一种RGD-蛛丝蛋白（pNSR16）、PVA、硝酸银三者为原料成分的含银纳米生物创面膜，能促进皮肤细胞的愈生长，加快损伤皮肤的愈合，同时也能起到抗感染的作用。

发明内容

本发明的目的主要是为了克服传统的创面膜抗菌性能不强、不具有生物活性、致孔方法复杂而提供的一种制备以RGD-蛛丝蛋白（pNSR16）、聚乙烯醇（PVA）、硝酸银三者为原料成分的重组蛛丝蛋白/含银纳米创面膜。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

（1）将PVA溶解在H₂O中配成质量浓度为9～13%的PVA水溶液，在电压10～30kv、固化距离10～30cm、挤出速度1～5mL/h、温度30～45℃下通过静电纺丝制备PVA纳米纤维膜；

（2）将质量浓度为0.3～1.0%的硝酸银稀溶液均匀喷洒在PVA纳米纤维膜，在70～95℃下烘干处理20-60分钟；

（3）将pNSR16溶解在甲酸中配成质量浓度为5-30%的RGD-蛛丝蛋白（pNSR16）的甲酸溶液，通过静电纺丝技术在电压50～150kv、固化距离10～30cm、挤出速度1～5mL/h、温度30～45℃下将RGD-蛛丝蛋白（pNSR16）的甲酸溶液电纺于含银的PVA纳米纤维膜，形成pNSR16复合的含银PVA纳米纤维膜，在70～95℃下烘干处理20-60分钟得重组蛛丝蛋白/银纳米生物创面膜。

本发明所用的RGD-蛛丝蛋白（pNSR16）是根据福建师范大学李敏等于2004年在《生物医学工程学杂志》（2004, 21(6):1006）上公开的“ RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因的构建、表达与纯化”方法制备得到的，其分子量分别约为65KD。

本发明的优点是：

（1）采用pNSR16这种来自生物体的天然蛋白质材料，使创面膜具有生物活性；