[发明专利]一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法

权利要求书

1.一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法具体是按以下步骤完成的：

一、配置为LB液体培养基：将酵母膏、蛋白胨和NaCl加入水中混合，在110℃~130℃灭菌10min~30min，得到LB液体培养基；其中，所述的蛋白胨与酵母膏的质量比为（1.5~2.5）:1，所述的NaCl与酵母膏的质量比为（1.5~2.5）:1，所述的水的体积与酵母膏的质量的比为（0.8L~1.2L）:1g；

二、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其中加入荧光细菌，在36℃~38℃的温度下，在50r/min~70r/min的条件下震荡培养8h~12h，得到平台期菌液；其中，加入的荧光细菌的体积与步骤一的酵母膏的质量比为（1mL~2mL）:1g；

三、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其中加入步骤二得到的平台期菌液，得到稀释平台期菌液；其中，加入的步骤二的平台期菌液与称取的步骤一得到的LB液体培养基的体积比为1:（10~1000）；

四、称取步骤三得到的稀释平台期菌液，向其中加入Mn²⁺，配制成Mn²⁺的质量－体积浓度为0.1mg/L~10mg/L的菌液，然后，将菌液震荡培养后，得到培养后的菌液Ⅰ；其中，震荡培养的条件为在36℃~38℃的温度下，在50r/min~70r/min的条件下震荡培养4h~6h；

五、对步骤四得到的培养后的菌液Ⅰ进行荧光强度检测，得到荧光强度；

六、重复步骤四和步骤五，得到不同Mn²⁺含量的培养后的菌液的荧光强度；

七、根据步骤六得到的数据，建立以Mn²⁺的质量－体积浓度为横坐标，以相对应的荧光强度为纵坐标的直角坐标系，并计算得到二元一次线性回归方程；

八、称取步骤三得到的稀释平台期菌液，向其中加入待测污水样品，与步骤四相同的条件进行震荡培养，得到培养后的菌液Ⅱ；其中，加入的待测污水样品与称取的步骤三得到的稀释平台期菌液的体积比为（1~2）:1000；

九、对步骤八得到的培养后的菌液Ⅱ进行荧光强度检测，得到荧光强度；

十、将步骤九得到的荧光强度通过步骤七得到的二元一次线性回归方程，计算得到污水样品的锰离子的质量－体积浓度，即完成了利用荧光细菌对污水的锰含量的检测。

2.根据权利要求1所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤一中的蛋白胨与酵母膏的质量比为2:1，NaCl与酵母膏的质量比为2:1，水的体积与酵母膏的质量的比为1L:1g。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤一中为在120℃灭菌20min。

4.根据权利要求1所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤二中的荧光细菌为大肠杆菌OP50-GFP菌株。

5.根据权利要求1或4所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤二中的加入的荧光细菌的体积与步骤一的酵母膏的质量比为2mL:1g。

6.根据权利要求1或4所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤二中为在37℃的温度下，在60r/min的条件下震荡培养10h。

7.根据权利要求1所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤三中的加入的步骤二的平台期菌液与称取的步骤一得到的LB液体培养基的体积比为1:100。

8.根据权利要求1所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤四中的配制的菌液中Mn²⁺的质量－体积浓度为0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L或10mg/L。

9.根据权利要求1或8所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤四中的震荡培养的条件为在37℃的温度下，在60r/min的条件下震荡培养5h。

10.根据权利要求1所述的一种利用荧光细菌检测污水的锰含量的方法，其特征在于：所述步骤八中的加入的待测污水样品与称取的步骤三得到的稀释平台期菌液的体积比为1:1000。