[发明专利]产无糖雷莫拉宁的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种产无糖雷莫拉宁的基因工程菌，其是一种抑制或敲除了产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株中糖基转移酶基因的基因工程菌。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，所述糖基转移酶基因为产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株的ramo-orf29基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1的2727-4586位所示。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株是游动放线菌Actinoplanes sp.ATCC 33076。

4.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株的ramo-orf29基因被全部抑制或敲除。

5.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株的ramo-orf29基因的第322-723位的核苷酸片段被抑制或敲除。

6.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株的ramo-orf29基因的第457-1365位的核苷酸片段被抑制或敲除。

7.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株的ramo-orf29基因的第937-1788位的核苷酸片段被抑制或敲除。

8.一种重组穿梭载体，其特征在于，其包含由在产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株基因组中与ramo-orf29基因连锁的上游基因或其片段、ramo-orf29基因5’端片段、ramo-orf29基因3’端片段、以及在产雷莫拉宁的游动放线菌野生菌株基因组中与ramo-orf29基因连锁的下游基因或其片段依次连锁组成的DNA片段。

9.如权利要求8所述的重组穿梭载体，其特征在于，所述的依次连锁组成的DNA片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

10.如权利要求8所述的重组穿梭载体，其特征在于，所述重组穿梭载体的骨架是质粒pKC1139。

11.一种转化子，其特征在于，其包含权利要求8-10任一项所述的重组穿梭载体。

12.如权利要求11所述的转化子，其特征在于，所述转化子的宿主细胞是大肠杆菌ET12567。

13.一种制备如权利要求1所述的产无糖雷莫拉宁的基因工程菌的方法，其特征在于，包括将权利要求11或12任一项所述的转化子与产雷莫拉宁的游动放线菌接合，挑选同源双交换接合子。

14.一种制备无糖雷莫拉宁或其衍生物的方法，包括培养如权利要求1-7任一项所述的产无糖雷莫拉宁的基因工程菌，从培养物中获得无糖雷莫拉宁或其衍生物。