[发明专利]一种复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤:

(1)配制复方血栓通制剂供试品溶液，精密吸取10μl复方血栓通制剂供试品溶液，注入双泵双梯度高效液相色谱仪，得到复方血栓通制剂HPLC标准指纹图谱；

（2）配制混合对照品溶液，精密吸取10μl复方血栓通制剂供试品溶液，注入双泵双梯度高效液相色谱仪，得到对照品HPLC指纹图谱；

（3）利用对照品对照法，采用RRLC/MS/MS技术手段指证指纹图谱中21个化学成分；

（4）分析21个化学成分与生物活性差异关联性，阐明生物活性成分群，建立复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱。

2.如权利要求1所述的复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）的复方血栓通制剂供试品溶液的配制方法为精密称取复方血栓通制剂0.1g～10.0g，用50%～100%甲醇提取1～3次，每次10～60分钟，每次10～100ml，滤过，合并滤液，蒸干，加50%甲醇配成供试品溶液。

3.如权利要求1所述的复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）的混合对照品溶液的配制方法为精密称取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、三七皂苷R₁、丹参酮Ⅱ_A、丹酚酸B对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg₁500μg、人参皂苷Rb₁500μg、三七皂苷R₁100μg、丹参酮Ⅱ_A20μg、丹酚酸B40μg的混合对照品溶液。

4.如权利要求1所述的复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述HPLC色谱条件采用长度为150mm、十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱温25℃；以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，0～50分钟，乙腈由15%变至34%，50～95min，乙腈由34%变至75%,流速为1.0ml/min；以紫外检测器检测，检测波长为203nm，270nm。

5.如权利要求1所述的复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于：用指纹图谱相似度评价软件分析得到复方血栓通制剂HPLC标准指纹图谱，有42个共有峰，其中，归属于三七的特征峰为2号峰、4号峰、10号峰、13号峰、14号峰、24号峰、25号峰、26号峰、29号峰、30号峰、32号峰、33号峰、36号峰、38号峰、41号峰，共15个峰；归属于丹参的特征峰为1号峰、3号峰、7号峰、9号峰、11号峰、15号峰、16号峰、18号峰、23号峰、31号峰、34号峰、35号峰、37号峰、39号峰、40号峰、42号峰，共16个峰；归属于黄芪的特征峰为5号峰、12号峰、17号峰、19号峰、27号峰、28号峰，共6个峰；归属于玄参的特征峰为6号峰、8号峰、22号峰，共3个峰；归属于黄芪、丹参、玄参三味药材浸膏的特征峰为20号峰，共1个峰；归属于三七药材浸膏的特征峰为21号峰，共1个峰。