[发明专利]一种聚乙二醇部分修饰的胶体金及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种聚乙二醇部分修饰的胶体金及其制备方法。

背景技术

胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂作用下聚合成的纳米金颗粒，这些纳米金粒子由于静电作用在溶液中分散成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。人类对于胶体金的认识最早可追溯到1857年，英国著名物理学家、化学家迈克尔·法拉第用还原法从氯金酸水溶液中制备出了胶体金，并发现了胶体金溶液在电解质溶液中的变色现象。随着现代纳米科技的发展，胶体金已经广泛应用到物理、化学及生命科学的各个领域，包括纳米材料自组装、生物标记、催化、电化学、相转移、及生物传感等（Langmuir，2009, 25(24), 13840–13851；Nano Today，2011，6, 286-308）。在分析化学领域，以免疫胶体金快速诊断技术为代表的胶体金诊断技术，在临床医学检测、激素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速检测，以及抗原抗体等诸多诊断领域得到迅速发展（《安徽农业科学》，2010, 38(16)：8429-8431）。

目前在分析化学及医学临床检测中最广泛使用的是用柠檬酸钠还原法制备的粒径为10-100纳米的胶体金（Nat. Phys. Sci. 1973, 241, 20-22; Chem. Rev., 2012, 112 (8), pp 4469–4506）。然而用柠檬酸钠还原法制备的胶体金在实际应用中有以下几方面的缺点：首先是胶体金的稳定性受缓冲电解质的影响较大。特别是在盐浓度较高的情况下，由于金纳米粒子表面所带的部分电荷被中和，纳米金在溶液中易发生团聚现象，从而有可能产生假阳性或假阴性的检测结果；第二，虽然标记上生物大分子如DNA或蛋白质之后，胶体金在电解质溶液中的稳定性有所增强，但在目标分子检测过程中，胶体金与目标物的结合会导致胶体金大量团聚。随着团聚体的增大，其表面所带的电荷逐渐减少，而质量却不断增加，因此在水溶液中难以再以胶体形式存在，将会随着反应时间的推进以沉淀形式析出，从而不利于对目标物的准确测定（Small, 2012, DOI: 10.1002/smll.201201061）。第三，传统方法制备的胶体金在生物分子标记时对目标物的选择性不强，容易产生非特异性吸附，从而影响分析结果的准确性。

利用聚乙二醇修饰来提高胶体金的稳定性及反应的特异性已经得到学术界的广泛认可，并在医学临床检测中得到了推广应用（J Am Chem Soc. 2009, 131(13): 4783-4787；Adv. Drug Deliver. Rev. 2012, 64, 246-255; Nanoscale, 2012, 4, 7135-7142; Biomaterials, 2012, 33(27), 6408–6419）。然而目前报导的方法大多为各向同性地在纳米金表面修饰上聚乙二醇，因此无法实现对目标物的定向反应，也无法解决目标物结合后导致的大量胶体金团聚所产生的胶体金沉降问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种聚乙二醇部分修饰的胶体金及其制备方法。应用该方法制备出的胶体金能同时克服传统胶体金的三大缺陷，从而增强胶体金在环境监测、食品安全控制及医学诊断等领域的实际应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种聚乙二醇部分修饰的胶体金的制备方法包括以下步骤：

（1）胶体金的制备：采用传统的柠檬酸钠还原法制备柠檬酸钠保护的胶体金溶液；

（2）纳米金在玻璃固相载体上的固定：包括以下三个步骤：

a. 将玻璃固相载体浸入体积比为4：1的浓硫酸与过氧化氢的混合溶液中氧化，然后放入超声仪中超声；所述的浓硫酸的含量大于等于98%；所述的过氧化氢的质量分数为30%；

b. 将处理过的玻璃固相载体浸入含季铵盐阳离子表面活性剂的溶液中，静置过夜；

c. 将上述表面组装有季铵盐阳离子表面活性剂双分子层的玻璃固相载体浸入步骤（1）的柠檬酸钠保护的胶体金溶液中，静置30-60分钟；

（3）聚乙二醇修饰：将步骤（2）中吸附有单层胶体金的玻璃固相载体浸入末端修饰有巯基的聚乙二醇溶液中，静置反应；