[发明专利]定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法

权利要求书

1.定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于包括以下步骤：

（1）样品前处理：

A．固体样品：将样品与超纯水按10mg：1ml混合，充分摇匀，制成待检样液；

B．液体样品：将样品充分混匀后得到待检样液；

（2）衍生化：将待检样液、混合多糖溶液以及标准葡萄糖溶液用3-氨基-9-乙基咔唑分别进行衍生化处理；

（3）质谱定性：以AEC衍生化的混合多糖溶液为参照，对AEC衍生化的待检样液进行质谱离子碎片峰的确证，确定还原性多糖的聚合度，对待检样液中所含还原性聚合多糖的种类进行定性；

（4）HPLC定量：对AEC衍生化的待检样液和AEC衍生化的标准葡萄糖溶液分别进行高效液相色谱分析；用AEC衍生化的标准葡萄糖溶液作为参比，分析制作标准葡萄糖曲线，以此对待检样液中各类还原性聚合多糖进行间接定量。

2.根据权利要求1所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：步骤（1）中所述的样品中的目标检测物为植物或植物提取物中的多糖。

3.根据权利要求1所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：步骤（2）中所述的混合多糖为Dextran Standard DXT1KMw1200。

4.根据权利要求1所述的定性和定量测定植物活性多糖的高效液相色谱-串联质谱方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的3-氨基-9-乙基咔唑衍生化处理的具体步骤如下：

①将3-氨基-9-乙基咔唑溶解于甲醇中，3-氨基-9-乙基咔唑的终浓度0.04mol/L，得到AEC甲醇溶液；

②用水配制氰基硼氢化钠，得到浓度为0.2mol/L的氰基硼氢化钠溶液；

③分别在待检样液、混合多糖溶液和标准葡萄糖溶液中加入步骤①制备的AEC甲醇溶液、步骤②制备的0.2mol/L的氰基硼氢化钠溶液和冰醋酸，其中待检样液、混合多糖溶液和标准葡萄糖分别同AEC甲醇溶液、氰基硼氢化钠溶液和冰醋酸的体积比为10:10:10:3；混匀，于70℃水浴加热1h，冷却后加入水，摇匀后，用氯仿进行洗涤，离心，取水相，得到AEC衍生化的待检多糖样液、AEC衍生化的混合多糖溶液和AEC衍生化的标准葡萄糖溶液。

5.根据权利要求4所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：

步骤③中所述的混合多糖溶液的浓度为0.01mol/L；

步骤③中所述的标准葡萄糖溶液的浓度为0.01mol/L；

步骤②和③中所述的水为超纯水；

步骤③中所述的洗涤的次数为2～3次；

步骤③中所述的离心的条件为5000rpm/min离心5min；

步骤③中所述的水相通过过滤纯化。

6.根据权利要求5所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：所述的过滤的条件为使用0.45μm滤膜过滤。

7.根据权利要求1所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：步骤（3）中所述的质谱定性的条件为液相色谱质谱条件，具体如下：流动相的比例为水相和有机相按体积比70:30配比，其中水相为含0.1mol/L乙酸铵的水溶液，经0.45μm水相滤膜过滤，有机相为纯乙腈；色谱柱为Waters C18；流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为5～20μL；检测波长为254nm；

质谱条件：离子化模式为电喷雾离子化；扫描模式为正离子Q1全扫描；离子扫描范围为m/z350～1500。

8.根据权利要求1所述的定性和定量测定植物活性多糖高效液相色谱-串联质谱法，其特征在于：步骤（4）中所述的高效液相色谱分析的条件为：流动相的比例为水相和有机相按体积比70:30配比，其中水相为含0.1mol/L乙酸铵的水溶液，经0.45μm水相滤膜过滤，有机相为纯乙腈；色谱柱为Waters C18；流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为5～20μL；检测波长为254nm。