[发明专利]一种耐高温耐乙醇生香酵母的驯化方法

权利要求书

1. 一种耐高温耐乙醇生香酵母的驯化方法，其特征在于：所述的驯化方法步骤如下：

（1）、以总酯含量和闻香为指标，同时兼顾酒精度，从市售的生香酵母中筛选得到生香优良的酵母菌株；

（2）、将步骤（1）筛选得到生香优良的酵母菌株接入麦芽汁培养基中培养至对数期，获得对数期生香酵母菌液，将对数期生香酵母菌液与海藻酸钠水溶液在室温无菌状态下混合均匀，再将混合液加入到氯化钙水溶液中制备成凝胶球颗粒，然后在2-4℃下固化4-5小时得固定化凝胶颗粒，用无菌水将固定化凝胶颗粒水洗后获得固定化生香酵母；

（3）、对固定化生香酵母在乙醇驯化培养基中进行耐高温耐乙醇的循环梯度驯化，具体设置参数为：循环梯度驯化的乙醇驯化培养基中乙醇体积百分比浓度范围为：最低浓度为1%-5%，最高浓度为10%-15%；循环梯度驯化的温度范围为：最低温度为28-32 ℃，最高温度为40-45 ℃；每个梯度采用乙醇体积百分比浓度的梯度增幅1%-3%及采用温度梯度增幅0.5℃-3℃；循环驯化多次，最后得到耐高温耐乙醇的生香酵母。

2.根据权利要求1所述的驯化方法，其特征在于：步骤（1）具体为：将市售的生香酵母纯化培养后在30℃下用麦芽汁培养基培养7天得发酵液，以国标GB/T 10345-2007为标准，闻香并测定发酵液酒精度、总酯，达标的酵母菌株即为生香优良的酵母菌株。

3.根据权利要求1或2所述的驯化方法，其特征在于：步骤（2）中凝胶球颗粒的具体制备方法为：采用1.0-3.0 g海藻酸钠加入有50 mL蒸馏水的250 mL三角瓶中，加热溶解后冷却，取3-5 mL对数期生香酵母菌液加入三角瓶中混合均匀，混合液通过注射器注入1-3%重量百分比浓度的氯化钙水溶液中，制备成凝胶球颗粒。

4.根据权利要求3所述的驯化方法，其特征在于：所述凝胶球颗粒的直径为2-3mm。

5.根据权利要求1所述的驯化方法，其特征在于：步骤（3）中循环梯度驯化的乙醇驯化培养基中乙醇体积百分比浓度范围为：最低浓度为1%-3%，最高浓度为10%-12%；循环梯度驯化的温度范围为：最低温度为28-30℃，最高温度为40-42℃。

6.根据权利要求5所述的驯化方法，其特征在于：循环梯度驯化的乙醇驯化培养基中乙醇体积百分比浓度梯度具体为：2%、4%、6%、8%、10%、12%，循环梯度驯化的温度梯度具体为：30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃、42℃。

7.根据权利要求1或5或6所述的驯化方法，其特征在于：步骤（3）中循环驯化次数为2-5次。

8.根据权利要求1或5或6所述的驯化方法，其特征在于：步骤（3）中每个梯度的驯化时间为24-72小时。

9.根据权利要求8所述的驯化方法，其特征在于：每个梯度的驯化时间为40-48小时。

10.根据权利要求1或2或5或6所述的驯化方法，其特征在于：乙醇驯化培养基由乙醇与YPD液体培养基混合组成。