[发明专利]含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体及其构建方法无效
| 申请号： | 201310005728.9 | 申请日： | 2013-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN103911387A | 公开（公告）日： | 2014-07-09 |
| 发明（设计）人： | 万晓春;林婷婷;向军俭;王蒲 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/79 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 吴平 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | lgg2a fc 标签 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将mIgG-Fc序列和pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌，筛选得到重组载体mIgG-Fc-pMD 18-T；
(2)将重组载体mIgG-Fc-pMD18-T和pcDNA3.1+质粒分别用Not I和Xba I进行双酶切，将分离纯化后的酶切产物进行连接，转化大肠杆菌，筛选获得含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体。
2.根据权利要求1所述的含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体的构建方法，其特征在于，所述mIgG-Fc序列是通过以下步骤制备得到的：
(a)以小鼠脾脏总RNA为模板，反转录合成cDNA第一链；
(b)以cDNA第一链为模板，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2为扩增引物，进行梯度PCR扩增，纯化，得到mIgG-Fc序列。
3.根据权利要求2所述的含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体的构建方法，其特征在于，步骤(b)中所述梯度PCR扩增的反应体系为：
反应程序为：95℃预变性2min，95℃变性30s，50-60℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环后，72℃延伸10min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌DH5α。
5.权利要求1-4任一项所述的的构建方法构建得到的含鼠lgG2a Fc标签的真核表达载体。
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