[发明专利]一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法

权利要求书

1.一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，其具体步骤如下：

（1）抑菌蛋白的提取：利用蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；

（2）装柱：称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15-20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3-5h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；上柱后用缓冲液进行充分平衡；

（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白粗品配成15-20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；

（4）洗脱收集：用缓冲液进行洗脱，其中缓冲液的流速为0.5-1.0mL/min，每2-5min收集一次洗脱液；将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的葡聚糖凝胶型号为：Sephadex G-150、Sephadex G-100或Sephadex G-75；凝胶柱的径高比为：1：（10-15）。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）和（4）所述的缓冲液均为：0.02-0.05mol/L的Tris-HCl，pH为7.1-8.5；步骤（2）中充分平衡凝胶柱的时间为2-5h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的注入到凝胶柱上的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的10-15%。