[发明专利]一种双糖苷及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种从见血清药材中提取、分离的双糖苷及其制备方法和用途。

背景技术

见血清为兰科植物脉羊耳兰Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.的全草，又称“立地好”、“黑兰”、“矮胖儿”，性寒，味苦，凉血止血、清热解毒。见血清常生长在山野、溪边等阴湿处，分布于四川、湖北、台湾等地，目前民间用药材均为野生。

迄今，国内外对见血清的研究报道较少，文献记载也不够详尽。在对见血清的止血研究上，周继铭等使用见血清与其他药材进行组方，发现复方见血清止血药对临床14类54例手术切口有显著止血效果，药物能被机体吸收，无继发性出血，伤口快速愈合（周继铭,刘常五,冉崇行等.复方见血清外用止血药的初步研究[J].中国医院药学杂志,1983,3(3):101-2.）。

目前，还未见有从见血清中提取、分离出的如结构式（I）所示的双糖苷的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构式（I）所示双糖苷及其制备方法和用途。

本发明提供了结构式（I）所示双糖苷：

本发明同时提供了结构式（I）所示双糖苷的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）取见血清粗粉，以60~95%乙醇提取，回收乙醇得浸膏；

（2）将所得浸膏加入蒸馏水混悬后，分别用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，取正丁醇部位，减压回收正丁醇得浸膏；

（3）取步骤（2）所得浸膏加入蒸馏水，然后上D101大孔吸附树脂，用包括浓度为60%的乙醇进行梯度洗脱，回收60%部位浸膏，然后通过硅胶短柱层析，分别以不同比例的氯仿-甲醇梯度洗脱，得到该化合物。

上述步骤（1）中的提取方法可采用冷浸、回流、超声或微波提取。

上述步骤（1）中的提取温度为85℃。

上述步骤（3）中分别用浓度为0%、30%、60%、90%的乙醇进行梯度洗脱。

本发明还提供了结构式（I）所示双糖苷在制备止血药物中的应用。

本发明提供的双糖苷为白色无定形粉末，其化学名称为3,5-二(3-甲基-2-丁烯)苯甲酸-4-O-β-D-吡喃木糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C₂₈H₄₀O₁₂，其核磁数据如下：

The ¹³C(100MHz) and ¹H(600MHz) NMR data of the compound in MeOD (δ in ppm, J in Hz )

下面通过药效实验来说明本发明的效果：

仪器：SYSMEX 凝血分析仪。

试剂：法国DLAGNOSTICA STAGO公司提供的PT、APTT试剂盒。

样品制备：将实施例1制得的本发明化合物溶于60%乙醇中，配制成浓度为：2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml溶液，空白对照组为60%乙醇溶媒，备用。

PT、APTT测定：取正常人血浆100μl于37℃水浴保温，加入待测样品20μl，采用凝固法，按照SYSMEX 凝血分析仪操作规程，依次测定PT、APTT。

结果：以SPSS10.0统计学软件作为统计工具，各指标用均数±标准差表示，数据采用配对t检验，结果见下表。

注：与空白对照组相比 *p<0.05

从表中可看出，目标化合物能显著缩短PT，说明该化合物可通过影响外源性凝血系统发挥止血作用。

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明的内容并不仅限于此。

具体实施方式

实施例1

（1）取见血清粗粉，以95%乙醇85℃回流提取2次，回收乙醇得浸膏；

（2）将所得浸膏加入等体积蒸馏水混悬后，分别用与混悬液等体积的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，取正丁醇部位，减压回收正丁醇得浸膏；

（3）取步骤（2）所得浸膏加入等体积蒸馏水，然后上D101大孔吸附树脂，分别用3倍柱体积的浓度为0%、30%、60%、90%的乙醇进行梯度洗脱，回收60%部位浸膏，然后通过硅胶短柱层析，分别以不同比例的氯仿-甲醇梯度洗脱，氯仿：甲醇（15:1）得该化合物。

实施例2

（1）取见血清粗粉，以65%乙醇85℃超声提取3次，回收乙醇得浸膏；