[发明专利]一种同时检测止咳宝片中四种有效成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时检测止咳宝片中四种有效成分含量的方法，尤其涉及一种HPLC法同时检测止咳宝片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮含量的方法。

背景技术

止咳宝片中富含多种中药材，具有解表散寒、宣肺除痰，益肺气养肺阴的功效，起到理肺祛痰和止咳平喘的功能。“止咳宝片秘方”入选岭南中药文化遗产保护名录。

止咳宝片现行标准收载于《中国药典》2010年版一部，其鉴别标准中收载了1个理化鉴别和3个薄层鉴别，而止咳宝片处方中有14味药。通过研究发现多种药味的薄层色谱之间均存在阴性干扰，尚无有效分离方法进行鉴别其有效成分，导致现有的质量控制方法未能有效实现产品质量的控制。且现有的检测方法存在实验步骤繁琐，实验条件不好控制等缺点，且方法的重复性和稳定性也不够理想。

为了更加有效控制本品质量，通过对处方中药味成份研究，应用现代高效液相色谱技术，本发明提供一种采用梯度洗脱、变化检测波长的含量测定方法，其能定性定量的同时测定止咳宝片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮的含量，方法简便而快捷，有效提高止咳宝片的质量控制水平，相对现有检测方法具有技术领先水平。

发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供一种同时检测止咳宝片中四种有效成分含量的方法，该方法应用现代高效液相色谱技术，采用梯度洗脱（两个梯度或三个梯度），同时变化检测波长，可定性定量的同时检测止咳宝片中五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮的含量，方法简便而快捷，而且专属性强，可有效提高止咳宝片的质量控制水平。

为了实现本发明的目的，所提供的技术方案如下：

一种同时检测止咳宝片中四种有效成分含量的方法，所述四种有效成分分别是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，所述方法包括如下步骤：

（1）确定色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，采用由乙腈为流动相A、水为流动相B组成的洗脱液进行梯度洗脱，理论板数按五味子醇甲峰计算不低于5000，梯度洗脱的程序及流动相A、B的体积百分比如下：

梯度1---0~20min，流动相A：B=40~65%：60~35%，A+B=100%，流速为1.0ml/min，检测波长为245~255nm；梯度1为等度洗脱；（五味子醇甲在0-20min内出峰）

梯度2----20~35min，流动相A：B=〔(40~65%)→(90~100%)〕：〔(60~35%)→(10~0%)〕，A+B=100%，流速为1.0ml/min，检测波长为220~235nm；梯度2为流动相A、B的体积百分比逐渐变化的梯度洗脱，其中流动相A、B分别由40~65%和60~35%逐渐变化到90~100%和10~0%；（20~35min内白花前胡甲素、白花前胡乙素先后出峰）

梯度3----流动相A：B=90~100%：10~0%，A+B=100%，流速为1.0~1.3ml/min，检测波长为195~205nm；梯度3为等度洗脱；待紫菀酮出峰后，继续洗脱至无杂质峰即可。

（2）制备对照品溶液；优选的对照品溶液制备方法是：精密称取五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮对照品，用甲醇溶解并配制成对照品溶液，使每1ml对照品溶液中含有3-7μg五味子醇甲、60-75μg白花前胡甲素、14-20μg白花前胡乙素、5-9μg紫菀酮。采用这一浓度范围的对照品溶液，有助于准确测定供试品中四种有效成分的含量。

（3）制备供试品溶液；优选的供试品溶液制备方法是：取止咳宝片供试品，除去包衣后研成细粉，用甲醇溶解并配制成0.04或0.08g/ml的供试品溶液。优选为0.08g/ml。

（4）测定：分别精密量取适量（例如10μl）对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，并按外标法以峰面积计算，即得检测结果。

一种同时检测止咳宝片中四种有效成分含量的方法，所述四种有效成分分别是五味子醇甲、白花前胡甲素、白花前胡乙素和紫菀酮，所述方法包括如下步骤：

（1）确定色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，采用由乙腈为流动相A、水为流动相B组成的洗脱液进行梯度洗脱，理论板数按五味子醇甲峰计算不低于5000，梯度洗脱的程序及流动相A、B的体积百分比如下：