[发明专利]一种重组抑制素疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抑制素疫苗及其制备方法和应用，涉及一种促进家畜发情及提高家畜繁殖力疫苗及其制备方法和应用，属于动物繁殖学领域。

背景技术

家畜繁殖力的高低直接影响到养殖和畜牧业的经济效益。部分家畜受到夏季高温应激、泌乳、舍饲环境、季节及管理等因素的影响，导致下丘脑-垂体-性腺调节轴的调节机能紊乱，使垂体不能分泌足够的促性腺激素以促进卵泡发育成熟并排卵，致使卵巢处于相对静止状态，而使得其表现为乏情而导致繁殖性能的下降。目前，在实际生产中，多采用外源激素（如促性腺激素、雌激素和前列腺素等）进行处理，以促进母畜卵泡发育并表现发情，然后进行配种使之完成繁殖活动。然而以上三种应用较广泛的激素，其作用机制较简单或作用环节较少，如促性腺类激素只能影响卵泡发育并且因为半衰期短而持续时间较短而对动物受胎率的提高或保持较少，雌激素和前列腺素类则几无促进繁殖活动的功能。因此，动物繁殖研究人员在不断进行研究以开发新颖生殖调控新技术和新产品，希望以较为简单的程序很好地促进性腺活动、发情、配种、胚胎发育、生殖道发育使胚胎着床受胎，从而提高动物的繁殖性能。

大量研究表明，母畜的卵泡发育是由促性腺激素促进的，同时也受到但一些局部调节因子的影响。例如，抑制素（INH）-活化素（ACT）-卵泡抑素（FS）系统是参与卵泡发育调节的重要的卵巢内局部调控因子。排卵前期优势卵泡分泌的大量抑制素（INH）通过负反馈机制抑制垂体FSH的分泌，抑制素和卵泡抑素同时也具有直接抑制小卵泡或后进卵泡的发育。通过主动或被动免疫抑制素中和内源性抑制素的生物活性，则可以一方面促进FSH的分泌，另一方面又去除抑制素对发育中卵泡的抑制或损害。

因此，之前人们的研究发现，主动免疫抑制素后，通过促进卵泡发育促进卵泡分泌更多雌二醇（E2），从而使母畜发情表现更为旺盛，发育良好的卵泡在排卵后转化为高质量的黄体并分泌高水平的孕酮(P4)。发情时主水平的E2影响雌性生殖道内环境，有助于精子的运行和精卵的结合。排卵后黄体发育分泌的孕酮，则进一步通过对子宫内分泌环境的影响，促进胚胎的发育。而且，我们的研究还发现，抗抑制素抗体能够促进体外成熟的卵子使之在受精之后发育为质量更高的胚胎。而以上各方面事件，都有助于提高动物配种的受胎率，也即提高动物的繁殖性能。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种能够促进雌性家畜发情及提高家畜繁殖力的重组抑制素疫苗及其制备方法和应用。

本发明的目的是这样实现的：一种重组抑制素疫苗，其特征在于：它是由油相制剂和水相制剂按照2:1的体积比混合而成的油乳剂，油相制剂由司本80、司本85和10号矿物油组成，其中含4％的司本80、2％的司本85；水相制剂由灭菌吐温80、重组抑制素α亚基蛋白和灭菌水组成，所述的重组抑制素α亚基蛋白由表达载体pREST-INH，经大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)表达并纯化后获得，水相制剂中含4％的灭菌吐温80。

在本发明中：疫苗中重组抑制素α亚基蛋白的含量为2mg/mL或1mg/mL或0.5mg/mL或0.25mg/mL。

一种上述重组抑制素疫苗的制备方法，其特征在于：

a) 4％的司本80、2％的司本85与10号矿物油匀浆机上3000rpm混合20分钟，121℃条件下高压灭菌，获得油相制剂，备用；

b)由表达载体pREST-INH，经大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)表达并纯化获得重组抑制素α亚基蛋白，将吐温80在121℃条件下灭菌15分钟，取无菌蒸馏水、灭菌后的吐温80以及重组抑制素α亚基蛋白在匀浆机上3000rpm, 20分钟混匀后形成水相制剂，备用；水相制剂中重组抑制素α亚基蛋白的含量为0.5~10mg/mL ，灭菌吐温80的含量为4％；

c) 将备用的油相制剂和备用的水相制剂按照2:1的体积比混合，具体步骤是：先将油相制剂置于匀浆机3000rpm中混匀，混匀过程中逐步加入备用的水相制剂，待全部水相制剂加入后继续混匀20分钟；获得重组抑制素疫苗，该疫苗中重组抑制素α亚基蛋白的含量为2mg/mL或1mg/mL或0.5mg/mL或0.25mg/mL。

一种上述重组抑制素疫苗的应用，其特征在于：对雌性家畜肌肉注射后，通过重组抑制素α亚基蛋白的免疫提高家畜繁殖力。

在所述重组抑制素疫苗的应用中：所述的雌性家畜为母猪或母羊或母水牛。