[发明专利]一种用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法有效
申请号: | 201310008125.4 | 申请日: | 2013-01-10 |
公开(公告)号: | CN103014118A | 公开(公告)日: | 2013-04-03 |
发明(设计)人: | 檀军;郭建军;魏超;杨佳琪;李刚 | 申请(专利权)人: | 贵州大学 |
主分类号: | C12Q1/02 | 分类号: | C12Q1/02 |
代理公司: | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人: | 李亮;程新敏 |
地址: | 550025 贵州省贵*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 抗癌 药物 筛选 细胞 培养 方法 | ||
1.一种用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:将酶标孔条拆分后放入6孔板中,将体积均为100ul,密度均为2×104个/ml的癌细胞与正常细胞分别接种到每个独立的酶标孔中,待所有的细胞贴壁后,向各酶标孔中加入10ul待测药物,再向6孔板中加入DMEM培养液8ml,使酶标孔浸没在培养液中,共培养48h后,吸尽培养液,用MTT法、台盼蓝染色法、CCK-8法、形态学观察法或hoechst染色法等进行细胞增殖、细胞毒或细胞凋亡检测,从而实现抗癌药物的筛选。
2.根据权利要求1所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:将酶标孔条进行拆分前,先将酶标孔在质量百分比为75%的乙醇中浸泡1.5~2.5h,然后在生物安全柜中风机开启模式下吹1h,再在紫外线下照射1~1.5h。
3.根据权利要求1所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:将酶标孔条进行拆分前,在无菌条件下用明胶或100ug/ml多聚左旋赖氨酸包被酶标孔。
4.根据权利要求3所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:所述的用明胶包被酶标孔具体是指,将明胶溶解在超纯水中,配制成0.2g/100ml的明胶溶液,待明胶完全溶解后,在温度为121℃、压力为100~110KPA的条件下,灭菌30min,将经过高压灭菌的明胶取出,获得配制好的明胶;在无菌条件下向每个酶标孔中加入15 ul配制好的明胶,将酶标孔底全部覆盖;再将包被了明胶的酶标孔放入37℃的二氧化碳培养箱中1个小时后取出,最后用无菌PBS或超纯水洗涤两次,每次100ul,用于下一步接种细胞实验。
5.根据权利要求3所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:所述的用多聚赖氨酸包被酶标孔具体是指,取分子量为15~30万的多聚左旋赖氨酸,溶于PBS或超纯水中,配成1mg/ml的储存液,将储存液过滤后置于-20℃冰箱中储存,使用时将浓度稀释至100ug/ml;然后在无菌条件下向每个酶标孔中加入15微升100ug/ml的多聚左旋赖氨酸,将酶标孔底全部覆盖,再将包被了多聚左旋赖氨酸的酶标孔放入37℃二氧化碳培养箱中5个小时或过夜后取出,用无菌PBS或超纯水洗涤两次,用于下一步接种细胞实验。
6.根据权利要求4或5所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:所述的无菌PBS是,称取1.6gNaCl、0.04gKCl、0.04gK H2PO4、0.44gNa2HPO4·7H2O,加入超纯水,溶解并定容至200ml,高压灭菌,在4℃下保存备用。
7.根据权利要求1所述的用于抗癌药物筛选的细胞共培养方法,其特征在于:所述的共培养是指用胰蛋白酶分别消化收集癌细胞与正常细胞,用倒置相差显微镜下计数,分别以2×104个/ml的浓度接种到各酶标孔中,每孔100ul,待细胞贴壁后分别加入10ul待测药物,并以不加入药物的有细胞培养液为无药对照组,以无细胞的培养液为空白对照组,放入37℃二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中共培养。
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