[发明专利]一种提高长春花组培苗移栽成活率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种长春花组培苗移栽方法，尤其是涉及一种提高长春花组培苗移栽成活率的方法。

背景技术

长春花(Catharanthus roseus L.) 属夹竹桃科一年生草本植物，可产生100多种具有很高药用价值的抗癌萜类吲哚生物碱(Terpenoid Indole Alkaloids, TIAs)。如长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、阿吗碱(Ajmalicine)、利血平(Reserpine)、文多灵（Vindoline）、长春质碱（Catharanthine）。长春碱临床上主要用于治疗何杰金氏病及绒毛膜癌，对乳腺癌的治疗效果也非常好。因此，长春花被认为是一种具有很高开发应用价值的药用植物。

目前，长春花抗癌生物碱主要从长春花植株的地上部分提取，但这些药物在长春花中的含量极其微少（仅为百万分之几至十万分之几），使长春花生物碱远远不能满足市场需求，导致长春花药用成分的供需矛盾相当严重（每年只能生产12 kg长春碱和1 kg长春新碱），使其价格极为昂贵（高达6000美元/克）。长春花快速繁殖和转基因均是以长春花组织培养为基础的，通过组织培养技术可获得大量长春花无菌试管苗。

现有的长春花组培苗移栽方法，通常是当植株长到一定程度的时候，将用于封口广口培养瓶的绳子解开，3～4天后，使广口培养瓶敞口，在光照培养箱中放置数天之后，直接移栽到花盆中。但长春花试管苗移栽到土壤中后，容易感染细菌，导致根部腐烂死亡，长春花试管苗的移栽成活率极低，仅仅在20％到30％之间，其主要原因是长春花再生植株的根系在清洗过程中不能彻底除去吸附在根系上的培养基，移栽到土壤后，一旦细菌和真菌接触到了植物根系上的培养基，培养基中的营养物质就导致了细菌和真菌的大量繁殖与生长，最终导致植株的根系出现腐烂问题，不能充分吸收营养，而使植株死亡。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种通过水培培养方式提高长春花组培苗移栽成活率的方法，该方法能增强长春花组培苗的抗菌能力，显著提高长春花组培苗移栽成活率。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种提高长春花组培苗移栽成活率的方法，包括以下步骤：

（1）炼苗：选取生长健壮正常的长春花无菌试管苗，移栽前，将培养瓶瓶盖打开，向培养瓶中加入适量蒸馏水浸没长春花根部，然后置于光照培养箱中培养3-4d完成炼苗，培养条件为1500-2500 Lx、23-27℃、每天光照周期为光照8-12 h，黑暗12-16 h； 

（2）水培：将经步骤（1）炼苗的长春花无菌试管苗用镊子从培养瓶中小心取出，将根系上的培养基用流水冲洗干净，放入盛有水培营养液的试管或培养皿中，置光照培养箱中继续炼苗，培养2-7d后，从长春花植株根部长出新的水生根，完成水培，其中水培营养液隔天换一次；

（3）移栽：将长出新根的长春花水培植株移栽到含有蛭石、珍珠岩和泥炭的移栽基质中，即完成长春花组培苗的移栽。

所述的水培营养液为蒸馏水或者浓度100-200 mg/L的羧苄青霉素水溶液。

所述的移栽基质中蛭石、珍珠岩和泥炭的重量比为2：1：6。

步骤（1）中所述的光照培养箱的培养条件为2000 Lx、25℃、每天光照周期为光照8 h，黑暗16 h。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了一种提高长春花组培苗移栽成活率的方法，该方法通过水培培养方式提高长春花组培苗移栽成活率，使长春花无菌试管苗经过一段时间的水培驯化以后，长出新的水生根，再将水培长春花再生植株移栽到培养基质中，增强长春花组培苗的抗菌能力，显著提高长春花组培苗的移栽成活率，使其移栽成活率达80%以上，该方法操作简单方便，费用低，适于批量处理和工厂化生产，具有很好的经济效益和社会效益。

本发明所用水培营养液为蒸馏水或添加羧苄青霉素的蒸馏水，而不用富含营养的培养基，目的是防止培养基中的营养物质招致细菌或真菌繁殖生长，而使试管苗污染死亡。放入蒸馏水中则可使根系中的一些细菌或真菌因缺乏营养物质而死亡，而对于长春花没有很大的影响，这样，能大大提高移栽的成活率。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

本发明一种提高长春花组培苗移栽成活率的方法，具体包括以下步骤：