[发明专利]羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及植物基因片段、RNAi载体、RNAi载体的构建方法，以及RNAi载体在植物育种中的应用。

背景技术

羽衣甘蓝为二年生草本植物，是食用甘蓝(卷心菜、包菜)的园艺变种，其叶色丰富多变，叶形也不尽相同，整个植株形如牡丹，因此又被形象地称为“叶牡丹”，是盆栽观叶的佳品。

株型是植物重要的农艺性状。微型化作为观赏植物株型的重要方面，已显示出良好的市场前景。例如，现代月季中的一个特殊品种——微型月季，因其株型矮小紧凑，叶片、花朵小巧可爱，不占空间，摆放位置选择性更大等优点，深受人们喜爱，目前已成为国际花卉市场上最受欢迎的盆栽花卉之一。因此，培育株型微型化的羽衣甘蓝品种，预计在未来的市场中也可以取得不错的成绩。

虽然传统育种在以往改良植物性状的过程中做出了巨大的贡献，但传统育种费时费力。近年来，随着基因工程的迅速发展和转基因技术的日益完善，基因工程育种已成为植物育种领域的一个重要分支。文献报道，番茄品种Micro-Tom的株型微型化，整个植株与普通番茄品种相比整体等比例缩小，其株型表现主要由两个隐性突变基因dwarf和self-pruning决定，其中DWARF基因编码油菜素内酯(调控植物生长发育的重要激素)合成途径中的关键酶BR-6-氧化酶，SELF-PRUNING基因主要控制茎顶端分生组织的发育潜力，与花序转化有关。文献还报道，赤霉素也是对植物茎杆伸长起重要调控作用的激素，而GA20ox是其合成途径的关键酶。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于克隆羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因片段，目的之二在于提供一种羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体，目的之三在于提供所述羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体的构建方法，目的之四在于提供含有所述羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体的微生物转化体，目的之五在于提供所述羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体在羽衣甘蓝植株育种中的应用，目的之六在于提供利用所述羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体进行羽衣甘蓝植株育种的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1．羽衣甘蓝DWARF基因片段，核苷酸序列如SEQ ID No.1中第1位至第936位所示。

2．羽衣甘蓝SP基因片段，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3．羽衣甘蓝GA20ox基因片段，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4．羽衣甘蓝DWARF、SP和GA20ox三基因RNAi载体，其含有一个hpRNA表达盒，所述hpRNA表达盒包括顺序连接的启动子、DWARF/SP/GA20ox三基因拼接片段的正向片段、DWARF/SP/GA20ox三基因拼接片段的反向片段和终止子；所述DWARF/SP/GA20ox三基因拼接片段包括DWARF基因片段或其互补片段、SP基因片段或其互补片段、以及GA20ox基因片段或其互补片段，所述DWARF基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1中第1位至第936位所示，SP基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，GA20ox基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。