[发明专利]单纯疱疹病毒2型HSV2检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种单纯疱疹病毒2型（HSV2）检测试剂盒，具体是一种基于荧光PCR的HSV2-DNA检测试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒(herpes simplex vires，HSV)是一种有包膜的线型双链DNA病毒，属于疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科，疱疹病毒属，是一类严重危害人类健康、引起皮肤病和性病的常见病原体，人类是它的唯一自然宿主。根据血清学、流行病学的研究，HSV可分为1型单纯疱疹病毒（HSV-1）和2型单纯疱疹病毒（HSV-2）。HSV-1主要引起眼、口、唇的皮肤和粘膜以及中枢神经系统的感染，产生疱疹性脑炎，疱疹性角膜炎等；HSV-2主要感染外生殖器部位的皮肤粘膜，引起生殖器疱疹（Genital herpes,GH）。

西方国家的GH流行病学调查显示，在性传播性疾病（Sexually Transmited Disease，STD）中GH的发病率越来越高，在全球范围每年约有八千六百万的患者，仅次于非淋病性尿道炎（宫颈炎）和淋病而居第三位。在国内情况也不容乐观，2002年全国STD流行病学调查结果显示，随着人们性行为的改变，STD流行谱在发生变化，GH的发病逐年呈上升趋势。在孕妇中GH的感染率也呈现上升的态势，随着孕妇HSV-2感染率升高，新生儿疱疹的发生率亦在上升。因此最有效的预防措施是开发灵敏、快速、准确的实验室诊断技术，提高无症状GH妊娠妇女的筛查水平，在妊娠早期及晚期及时准确地诊断这类感染者，并采取积极防治措施，降低胎儿及新生儿的感染率，这对促进优生优育、提高人口出生质量具有重要的实际意义。

目前生殖器疱疹的实验室诊断方法主要有细胞培养法、血清学方法、基于PCR技术的检测方法等。细胞培养法的敏感性和特异性均较高，是临床诊断和鉴定HSV感染最为可靠的方法，但此方法对无症状病毒排放、早期皮损及结痂性皮损中的HSV检出敏感性差，培养所需时间长，而且其实验室环境及操作均要求严格，在临床实验室不易普及。血清学方法检测血清中的抗体，适用于潜伏期、无症状或皮疹不典型的病人及流行病学调查；包括型特异性血清抗体检测、间接免疫荧光法（IIF）、免疫印迹法、ELISA法、竞争性ELISA法及SIA等方法，其操作简单，有商品化试剂盒，适合于临床辅助检查诊断及流行病学调查，缺点是无统一的标准。近年来，聚核酶链式反应(PCR)法渐渐显现了其在检测上的优势，荧光PCR技术是基于传统PCR技术并结合光谱技术而发展起来的一种更灵敏，更特异，更精确的核酸检测技术。检测结果准确，重复性高，能动态反应患者治疗前、后病原体动态变化及与临床的关系，且整个过程中避免了传统PCR需后处理的问题，减少了污染。

定量PCR的出现，打破PCR只能定性的局面，其中荧光定量PCR以其高灵敏度、高特异性、低污染率、实时监测等特点，可为临床提供更加准确、客观的检测结果，并及时地了解病情及预后。

运用PCR技术进行检测主要涉及到两个方面，核酸的提取和核酸的扩增检测。

目前国内临床上主要采用煮沸法对单纯疱疹病毒2型的核酸进行提取，具体是先将分泌物样本浓缩、洗涤，再加裂解液，煮沸，高速离心，取上清为模板；该方法核酸提取过程较复杂，样本处理耗时长，且在处理样本时，经过煮沸裂解、高速离心富集DNA等多个步骤，样本中的DNA存在损耗，尤其对于高浓度的样本，裂解不充分、富集不完全，会造成DNA的大量丢失导致样本定量偏低，同时由于采用了水浴或金属浴的高温加热步骤，容易造成气溶胶污；另外，对于浓缩这一步，不同厂家的浓缩效果不一样，有的可以看到沉淀，有的无法看到，能看到沉淀是因为该步骤将病毒与蛋白都浓缩了，这样会导致后面加入裂解液时很难充分混匀；无法看到沉淀的则使操作者无法确定吸弃上清时会不会吹打到病毒核酸。