[发明专利]淋球菌NG检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种淋球菌（NG）检测试剂盒，具体是一种基于荧光PCR的NG-DNA检测试剂盒。

背景技术

奈瑟淋球菌（Neisseria gonorrheae，NG）1879年由Neisser发现，俗称淋病双球菌或淋球菌，是引起人类淋病的致病病原体，属奈瑟菌属。淋球菌（NG）有严格的人类寄生性，对人体有较强的适应和侵袭能力，其主要致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白酶、脂多糖等，是发展中国家发病率较高的性传播疾病之一。NG主要通过性接触直接感染，也可以通过接触患者的衣物或马桶等间接感染，还可以通过产道感染分娩时的胎儿。

淋病是世界上发病人数较多的性病之一，估计每年世界的患病人数大约有1亿；在美国，据保守的估计，每年至少发生100万例患者。我国在解放后不久淋病基本消灭，但是从1977年起淋病死灰复燃，并迅速蔓延到全国各地，在短短的几年时间里报告病例数迅速攀升，至九十年代中期达到高峰，此后其发病水平开始缓慢回落，但仍然维持在较高水平。近年来，淋病的发病水平又呈上升的势头，在性传播疾病中位居前列。

由NG感染引起的疾病是性传播疾病中的一种重要疾病，由于NG感染者临床症状不典型，如何快速、准确的进行检测，对疾病的诊断、治疗和控制等有着十分重要的意义。

目前淋球菌的实验室诊断方法主要有分离培养法、涂片镜检法、免疫学方法、基于PCR技术的检测方法等。分离培养法的操作简单，特异性较高，被认为是诊断淋球菌的“金标准”，但是培养耗时比较长，同时敏感性较低，可能因病原微生物的量过少，或接种后病原微生物不成活而延误病情。涂片镜检法简便易行，价格低廉，但其特异性受取材、涂片、染色等各种因素的影响，且镜下淋病双球菌极易与其他的革兰氏阴性双球菌混淆，易发生误诊和漏诊。免疫学方法主要包括酶联吸附试验和免疫胶体金技术，操作简单且灵敏性优于培养法。近年来，聚核酶链式反应(PCR)法渐渐显现了其在检测上的优势，荧光PCR技术是基于传统PCR技术并结合光谱技术而发展起来的一种更灵敏，更特异，更精确的核酸检测技术。检测结果准确，重复性高，能动态反应患者治疗前、后病原体动态变化及与临床的关系，且整个过程中避免了传统PCR需后处理的问题，减少了污染。

定量PCR的出现，打破PCR只能定性的局面，其中荧光定量PCR以其高灵敏度、高特异性、低污染率、实时监测等特点，可为临床提供更加准确、客观的检测结果，并及时地了解病情及预后。

运用PCR技术进行检测主要涉及到两个方面，核酸的提取和核酸的扩增检测。

目前国内临床上主要采用煮沸法对淋球菌的核酸进行提取，具体是先将分泌物样本浓缩、洗涤，再加裂解液，煮沸，高速离心，取上清为模板；该方法核酸提取过程较复杂，样本处理耗时长，且在处理样本时，经过煮沸裂解、高速离心富集DNA等多个步骤，样本中的DNA存在损耗，尤其对于高浓度的样本，裂解不充分、富集不完全，会造成DNA的大量丢失导致样本定量偏低，同时由于采用了水浴或金属浴的高温加热步骤，容易造成气溶胶污；另外，对于浓缩这一步，不同厂家的浓缩效果不一样，有的可以看到沉淀，有的无法看到，能看到沉淀是因为该步骤将核酸与蛋白都浓缩了，这样会导致后面加入裂解液时很难充分混匀；无法看到沉淀的则使操作者无法确定吸弃上清时会不会吹打到核酸。