[发明专利]一种肝素钠的精制方法

说明书

技术领域

本发明属于生化行业领域，具体地说，涉及一种肝素钠的精制方法。

背景技术

肝素钠是肝素的钠盐形式产物，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖类天然抗凝血物质。可广泛用于防治各种心脑血管疾病，在临床应用中广受青睐。

肝素钠广泛存在于哺乳动物的肠粘膜、肺、肝中，特别是猪小肠粘膜中含量最高。目前我国生产的肝素钠主要以猪小肠粘膜为原料进行提取，由于肝素钠在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在，故使得粗品中会残留一定量的蛋白质，影响了产品的品质。

目前，我国肝素钠的精制主要采用酶解、盐解、吸附的一种或多种生产工艺。申请号为201210161795.5和申请号为201110067346.X的专利采用树脂吸附的方法来精制肝素钠，申请号为201110169065.5的专利采用酶解法进行精制，专利号为201210095896.7采用盐解、酶解与吸附相结合的方式进行精制，由于采用单一的吸附或酶解法进行精制很难得到效价高的肝素钠，而酶解反应由于反应速度较慢，酶用量大，生产周期长，且纯化时采用多次溶解再沉淀的方法，酒精用量大，并且产品收率低，大大影响了生产效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种吸附除杂与添加酶激活剂进行酶解的联合精制肝素钠的方法，该方法能解决单纯的吸附与酶解难以彻底除杂的问题，且通过酶激活剂的使用，大大缩短了酶解时间，提高了生产效率。

本发明的解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种肝素钠的精制方法，包括下述步骤：

（1）预处理：将粗品肝素钠进行粉碎、过筛；

（2）溶解：按照粗品肝素钠：水的重量比为1:5~20进行溶解；

（3）酶解：在步骤2所制成的肝素钠溶液中加入胰酶和酶激活剂，在pH6~9、45~60℃下酶解2~6小时；

（4）升温至70~90℃，过滤取滤液；

（5）将步骤4所得的滤液经氧化、吸附、过滤、超滤浓缩、沉淀、脱水后制得肝素钠。

优化地，所述步骤（1）中肝素钠粗品经粉碎过筛后所得为直径小于30目的粉末。

优化地，所述步骤（3）中加入胰酶的量为溶液质量的2%-8%。

优化地，所述步骤（3）中所用酶激活剂为氯化钙、醋酸钙的一种或两种，所用量为溶液质量的0.05%-0.15%。

优化地，所述步骤（5）中氧化为在步骤（4）所得滤液中加入双氧水，对滤液进行氧化处理，加入量为滤液质量的0.1%-1%。对滤液进行氧化处理。

优化地，所述步骤（5）中吸附为向氧化后的滤液中加入占滤液质量分数0.2%-2%的Ca₃(PO₄)₂以除去滤液中的杂质。

优化地，所述步骤（5）中过滤为采用板框过滤，采用0.22微米的醋酸纤维素滤膜。

优化地，所述步骤（5）中超滤浓缩为选用截留分子量为3000的醋酸纤维素滤膜。

优化地，所述步骤（5）中沉淀为将超滤浓缩后的溶液中用盐酸调节pH至5.0~6.0，边搅动边加入乙醇，使乙醇度数在38~45度，静置10~12小时沉淀。

优化地，所述步骤（5）中脱水用无水乙醇脱水，离心后真空干燥。

本发明的有益效果为利用吸附除杂和酶解的方法联合精制肝素钠除杂较彻底，得到的产品效价高，收率高，且通过添加酶激活剂使酶解速率大大提高，减少了酶的用量，缩短生产周期，降低生产成本，利于工业化生产。

具体实施方式

实施例1 

本发明的具体步骤为实验前先对所用器具、试剂、耗材进行高压灭菌。具体步骤如下：

1、将粗品肝素钠用粉碎机粉碎、过筛，得到直径小于30目的粉末；

2、按照粗品肝素钠：水的重量比为1:5进行溶解；

3、在步骤2所制成的肝素钠溶液中加入质量分数为2%的胰酶和0.05%的氯化钙，在pH6、45℃下酶解2小时；

4、升温至70℃，过滤取滤液；

5、在滤液中加入质量分数为0.1%的双氧水和0.2%Ca₃(PO₄)₂,选用0.22微米的醋酸纤维素滤膜进行半框过滤，选用可截留分子量3000的醋酸纤维素滤膜进行超滤浓缩，将滤液用盐酸调pH为5.0，边搅边加乙醇，度数为38度，沉淀10小时，脱水干燥用无水乙醇脱水，离心后真空干燥。

     将实验过程及产品各数据记录于表1。 

实施例2