[发明专利]一种预测反相高效液相色谱梯度洗脱模式保留时间的方法

说明书

技术领域

本发明涉及液相色谱技术，特别涉及一种预测反相高效液相色谱梯度洗脱模式保留时间的方法。

背景技术

反相高效液相色谱是液相色谱中应用范围很广的一种色谱模式。等度洗脱技术是应用于液相色谱领域中比较简单的洗脱方法。然而当样品所含组分的极性相差很大时，如果流动相的洗脱能力比较弱，则保留能力强的组分洗脱时间很长，导致色谱峰展宽严重，峰高降低明显，检测灵敏度下降；如果流动相的洗脱能力比较强，保留能力弱的组分则在接近死体积下就被洗脱出色谱柱，分离效果很差。梯度洗脱解决了以上问题。

在梯度洗脱过程中，流动相的强度随洗脱的进行而逐渐的增大。对于保留能力弱的组分，可以在较低的流动相强度下洗脱出来，并且产生很好的分离效果；在梯度洗脱的后期，随着流动相强度的增大，保留能力强的组分在色谱柱中的移动速率增加，加速洗脱，且分离效果不会降低。并且，有些在等度洗脱条件下出现严重拖尾的色谱峰，在梯度洗脱模式下拖尾情况明显减轻。

根据调研和文献检索，国内外目前所应用的保留模型主要分两类：一类是比较严密的模型，这些模型试图对保留过程做出精确描述，但由于参数过多，实用性很低；另一类为简单实用型，在等梯度或梯度洗脱模式优化中经常使用，有双参数模型、三参数模型和四参数模型等，这些模型只能对保留过程做出简单的描述。

发明内容

本发明提供了一种预测反相高效液相色谱梯度洗脱模式保留时间的方法，本方法不仅能够高精度的预测出任意梯度条件下的保留时间，而且预测过程简单，详见下文描述：

一种预测反相高效液相色谱梯度洗脱模式保留时间的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）获取描述流动相组成和容量因子关系的保留方程；

（2）运用塔板理论对线性多阶梯度洗脱条件近似处理，获取第i阶段梯度洗脱的起始体积分数和对应的保留因子k_i；

（3）通过起始体积分数和对应的保留因子k_i获取待测化合物在流动相中的浓度，根据待测化合物在流动相中的浓度计算出待测化合物保留时间。

所述获取描述流动相组成和容量因子关系的保留方程具体包括：

其中a、b、c、d为拟合参数；k为容量因子；为弱极性溶剂B在流动相的体积分数；

测量弱极性溶剂B在流动相的不同体积分数下的保留时间，再根据t_R=t₀(1+k)计算该体积分数下的容量因子k，t_R为保留时间、t₀为死时间；

根据不同的体积分数及对应容量因子k拟合保留方程，得到相应的拟合参数a、b、c、d。

所述获取第i阶段梯度洗脱的起始体积分数和对应的保留因子k_i具体包括：

1）在多阶梯度洗脱条件下，计算多阶梯度洗脱总时间t；

t＝∑t_hi+t_i

其中t_hi为第i阶段梯度洗脱的终止体积分数保持时间，t_i为第i阶段梯度洗脱的需要时间，

为第i阶段梯度洗脱的终止体积分数，为第i阶段梯度洗脱的起始体积分数，r_i为第i阶段梯度洗脱的速率；

2）确定待测化合物第i次跳跃时，对应的起始体积分数

3）通过计算出待测化合物第i次跳跃时，对应的保留因子k_i。

所述通过起始体积分数和对应的保留因子k_i获取流动相浓度，根据流动相浓度计算出待测化合物保留时间具体为：

1）利用第i次跳跃对应的保留因子k_i，分别计算待测化合物在第1、2、3…n…N块塔板中固定相浓度C_gni和流动相浓度C_lni；

2）通过计算得到待测化合物第i-1次、第i次和第i+1次跳跃时，第N块塔板上流动相的浓度分别为C_lN(i-1)、C_lNi和C_lN(i+1)；当C_lNi>C_lN(i-1)，且同时C_lNi>C_lN(i+1)时，停止计算，从而确定跳跃次数i值，计算待测化合物保留时间。

化合物保留时间具体为：化合物保留时间与仪器滞留时间之和。