[发明专利]流感病毒温度敏感株关键位点的筛选、突变株及其机制的探讨

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，本发明具体地涉及温度敏感型流感病毒突变株A/PR8/34(H1N1)/PB1-391/581和A/PR8/34(H1N1)/PB1-265/591+PB2-478及其构建方法，以及所述突变株的温度敏感型及减毒表型的研究，并从分子生物学、细胞及动物水平对其进行了分析及筛选，具有临床应用价值。

背景技术

A型流感病毒是具有高度传染性的人类和动物病原体。作为一个主要的冬季呼吸道感染，季节性流感仍是发病率和死亡率的重要原因。流感流行伴随着死亡率的增加。增加的死亡率不仅仅由流感和肺炎引起，也与流感引起的心肺疾病和其他慢性病恶化有关。

接种疫苗是预防和控制流感的主要战略。两种不同类型的疫苗，灭活和活的，目前获准用于预防季节性流感。三价季节性流感疫苗，每个剂型包含三种病毒(或HA蛋白)，即最有可能在即将到来的流感季节流通的A型H3N2、H1N1及B型流感株。自1945年以来三价灭活流感疫苗(TIV)已被使用。三个减毒活疫苗在2003年通过了美国FDA批准；2009年9月，FDA又批准了一株LAIV鼻内的新型甲型H1N1流感病毒疫苗。

在美国，冷适应性流感病毒A/AA/6/60(H2N2)是减毒三价季节性流感活疫苗的主要组成。该病毒最初是取喉咙洗出液于36℃在鸡胚肾组织培养，逐步降低温度到25℃至连续传代适应。该病毒复制效率在25℃和33℃，但在温度超过39℃不能有效地复制；这些表型性状分别为冷适应(CA)和对温度敏感的(TS)表型。此外，该病毒在体内减毒(ATT表型)，并仅限于小鼠和雪貂的呼吸道中复制。这些表型是由三个基因(PB1，PB2和NP)段指定的五个突变。

在俄罗斯有两株冷适应性流感疫苗，均来自同一H2N2株A/Leningrad/134/57，已适应25℃鸡胚增长。第一株，Len/17，传代17次，已用于成人。第二，Len/47，传代47次，并已用于年龄小于16岁的儿童。

虽然减毒活疫苗已被批准用于人类，但是它的机制还不清楚。病毒RNA聚合酶在感染禽类和人类的流感病毒株中高度保守。我们检测了聚合酶活性和RNA水平，试图解释减毒活疫苗的机制。本实验选择突变A/PR8(H1N1)。通过反式遗传技术，改良了PB2和PB1基因，使其获得温度敏感和减毒表型。我们的研究建议，这些用于减毒活疫苗制备的突变位点可以用于流感流行株的制备，利于季节性流感的预防。

发明内容

本发明旨在构建一种通用的温度敏感型流感活疫苗，从而有效地预防流感病毒。

本发明首次从PB1和PB2基因水平上，基于A/AA/6/60(H2N2)和A/Leningrad/134/57/17关键位点信息去构建新的温度敏感型流感突变株。

本发明所述的流感病毒活疫苗，其在PB1和/或PB2基因中包含与A/AA/6/60(H2N2)和A/Leningrad/134/57中的突变位点相似的突变位点。

本发明的优选实施例中，筛选出温度敏感株具有温度敏感型和减毒表型。

本发明的优选实施例中，上述的敏感株突变位点基于A/AA/6/60(H2N2)和A/Leningrad/134/57的突变位点信息选择。