[发明专利]一种检测食品中残留过氧化氢的酶-比色法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测中过氧化氢的检测，尤其是采用酶-比色法对食品中残留过氧化氢的测定。

背景技术

过氧化氢俗称双氧水，无色、无味，有氧化性、除臭、脱色和杀菌等作用。同时，双氧水在无菌食品包装杀菌工序是常用的杀菌剂，如乳品生产中利乐包装设备必须使用过氧化氢杀菌剂。然而由于双氧水的特殊性质，不法人员将其加到食品中使卖相变得更好或保质期更长，过去在牛奶、豆腐干、水产品、水发产品、肉制品等食品中都有检出。在牛奶生产过程中有人滥用工业过氧化氢来抑制细菌的繁殖，降低亚硝酸盐的含量。但高浓度的过氧化氢不仅会影响食品的品质，也会严重损害消费者的健康。

在GB2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》中，过氧化氢已从食品添加剂中删除，被列入了“食品工业用加工助剂使用名单”，在食品生产加工作为助剂可以使用。根据《食品安全法》规定，食品中的过氧化氢残留不得检出。因此研究一种有效、快速、特异性强、检测限低的方法是十分必要的。

食品中残留过氧化氢的检测方法主要有滴定分析(高锰酸钾法或碘量法)、分光光度法、荧光法、高效液相色谱法。我国检测食品中残留过氧化氢的方法为国家标准GB/T23499-2009《食品中残留过氧化氢的测定方法》，该标准中采用的是碘量法和钛盐比色法。而液相色谱法需要较昂贵的仪器，且样品前处理也比较复杂，检测时间长。市场上同时也有快速检测过氧化氢的试纸和检测仪，如双氧水试纸条，基于传感器和电分析的便携式过氧化氢检测仪等。根据过氧化氢的特性，研制出来的常见快速方法有试纸法，如柴春彦等利用光典型生物传感器制成的过氧化物酶测试条(CN200710047154，检测食品中过氧化氢快速测试条)；谢莉等研制的过氧化物酶催化四甲基联苯胺显色的试纸条(牛奶中过氧化氢快速检测试纸条的研制，食品科技，2012，37(3)，301-303)；王炜军等公开了一种利用过氧化物酶和显色剂反应来测定过氧化氢浓度的酶试纸(CN100516843C一种用于测定过氧化氢浓度的酶试纸)。

本发明建立了一种检测食品中残留过氧化氢的酶-比色法，该方法简单、快速、准确、有效、成本低，能实现大批样品的快速定性定量检测，检出限低。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定食品中残留过氧化氢的方法。为此，本发明采用的技术方案是：

(1)将固体样品粉碎均匀，取样5-10g(精确至0.001g)，对液体样品混匀后量取10-20mL于50mL容量瓶中。依次加5mL硫酸锌溶液，5mL亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白和脂肪，混匀，加水定容至刻度。放置10-20min。用滤纸或0.45μm滤膜过滤。

如果沉淀蛋白和脂肪后的样品溶液含有颜色，可加入1g活性炭振摇1min，滤纸过滤，或将样品溶液通过活性炭固相萃取小柱，除色，收集净化液，待用。如果经过活性炭吸附试样液仍然有颜色干扰，测定时应扣除试样液的本底色。

(2)滤液用稀酸和稀碱调节溶液pH值在7.6，混匀后用滤纸或0.45μm滤膜过滤。

(3)取10-20mL滤液于25或50mL容量瓶中，加入过氧化物酶试剂溶液1-3mL，30-40℃水浴恒温显色10-20min，冷却至室温，定容至刻度。

(4)采用分光光度法进行检测，在470nm波长处测定吸光度。吸光度与过氧化氢的含量成正比，从而计算样品中过氧化氢的含量。

步骤(1)中所用的硫酸锌溶液配制：称取53.5g七水硫酸锌溶于水中，并稀释定容至100mL。

步骤(1)中所用的亚铁氰化钾溶液配制：称取17.2g三水亚铁氰化钾溶于水中，并稀释定容至100mL。

步骤(2)中所用的稀酸，为稀盐酸或稀硫酸溶液，质量浓度0.01-1.0％。

步骤(2)中所用的稀碱，为稀氢氧化钠或氢氧化钾溶液，质量浓度为0.01-1.0％。

步骤(3)所用的过氧化物酶试剂溶液由辣根过氧化物酶、邻甲氧基苯酚的磷酸盐缓冲液显色剂组成。含邻甲氧基苯酚0.0050mol/L的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.6)。使用时将辣根过氧化物酶固体粉末加入到混合溶液中，轻轻混匀，配制成酶活力5U(活力单位)/mL，4℃下可以保存1个月。

步骤(3)中所用的水浴温度，优选37℃。