[发明专利]一个基于随机单接头扩增DNA文库的方法无效
申请号: | 201310013630.8 | 申请日: | 2013-01-15 |
公开(公告)号: | CN103060310A | 公开(公告)日: | 2013-04-24 |
发明(设计)人: | 张玉祥;邹斌斌 | 申请(专利权)人: | 首都医科大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68;C40B50/06 |
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地址: | 100069 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一个 基于 随机 接头 扩增 dna 文库 方法 | ||
1.一个基于随机单接头扩增DNA文库的方法,其特征在于用一个随机生成的序列加上一个酶切序列构成一个双链单接头,把双链单接头加到文库DNA两端,用接头引物就能扩增文库DNA。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于用接头引物扩增两端加上接头的文库DNA。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)随机单接头的设计与合成;
(2)文库DNA与随机单接头相连;
(3)扩增文库DNA,并切除接头。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于步骤(1)随机单接头的设计与合成:
用程序或软件生成随机序列,根据需要在3’末端加入酶切位点,并使双链接头3’T突出,送引物合成公司合成。
根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于步骤(2)文库DNA与随机单接头相连:
用Klenow Fragment(3′-->5′exo-)处理文库DNA,用T4DNA Ligase连接文库DNA与随机单接头。
5.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于步骤(3)扩增文库DNA:
用随机单接头引物用PCR扩增DNA文库,并用相应的限制性内切酶切除接头。
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