[发明专利]一种RNA及载体在制备预防和/或治疗肝癌产品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种RNA及载体在制备预防和/或治疗肝癌产品中的应用。

背景技术

目前全世界现在有3.5亿人感染HBV（乙型肝炎病毒），在中国约有9300万人慢性感染HBV，大约15-40%的感染人群可能发展为威胁生命的疾病例如肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌等，慢性HBV感染严重危害人们身体健康。现有用于慢性乙肝患者的治疗方法包括α-干扰素（IFN-α）和核苷或核苷类似物（如拉咪呋啶、阿德福韦和恩替卡韦），干扰素-α是第一个获得临床治疗乙肝病毒感染的药物，作为重要的一线药物，聚乙二醇干扰素-α单一治疗能有效治疗25-40%的慢性乙型肝炎患者，在与核苷酸类似物联合使用能产生更大的持续抗病毒学疗效和在HBeAg阳性患者中病毒e抗原转阴，但干扰素-α治疗副作用明显，停药后容易反弹，部分患者对干扰素-α反应不敏感，疗效差。核苷类似物疗程长，停药后病毒易反弹，而且引起突变、增加耐药性。在中国肝细胞癌多数由慢性乙肝感染引发，而且目前临床没有有效的药物治疗。因此，迫切需要开发新的乙肝和肝癌治疗性药物以补充或替代现有的抗病毒治疗方案和肝癌治疗。

MicroRNA（miRNA）是一类大约22个核苷酸的非编码小RNA，其功能主要是负调控靶基因表达，通常与目标基因的mRNA3'端非编码区互补配对诱导目标基因的翻译抑制，mRNA脱腺苷化和降解。MicroRNA-122（miR-122）在哺乳动物肝脏中特异性高表达，占肝脏总microRNA含量的70%。

发明内容

本发明的一个目的是提供重组腺病毒载体。

本发明提供的重组腺病毒载体，为将miR-122的至少一个编码基因插入pDC312-cmv腺病毒载体中得到的重组腺病毒载体；

所述miR-122为序列表中的序列1所示的RNA或序列表中的序列3编码的RNA。

序列表中的序列3编码的RNA为序列1所示的RNA的前体。

上述重组腺病毒载体具体为如下1）或2）：

1）所述重组腺病毒载体为将所述miR-122的1个编码基因插入pDC312-cmv腺病毒载体的多克隆位点间得到的载体；

2）所述重组腺病毒载体为将所述miR-122的8个编码基因插入pDC312-cmv腺病毒载体的多克隆位点间得到的载体。

上述重组腺病毒载体中，所述miR-122的编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列3；

所述miR-122的8个编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列4。

1）所述重组腺病毒载体为将序列表中的序列3所示DNA分子插入pDC312-cmv腺病毒载体的多克隆位点间得到的载体；具体为将序列3所示的DNA分子插入腺病毒表达载体pDC312-cmv的BamHI和Xho1酶切位点之间，得到重组质粒pDC312-miR-122。

2）所述重组腺病毒载体为将序列表中的序列4所示DNA分子插入pDC312-cmv腺病毒载体的多克隆位点间得到的载体。具体为将序列表中序列4所示的DNA分子插入腺病毒表达载体pDC312-cmv的BamHI和Xho1酶切位点之间，得到重组质粒pDC312-8miR-122。

本发明的另一个目的是提供一种重组腺病毒。

本发明提供的重组腺病毒，为将上述的重组腺病毒载体转入宿主细胞，包装得到的重组腺病毒；所述宿主细胞具体为人胚肾细胞；人胚肾细胞进一步具体为人胚肾细胞HEK293。

miR-122在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用也是本发明保护的范围：

1）预防和/或治疗肿瘤；

2）减小肿瘤数量和/或肿瘤重量；

所述miR-122为序列表中的序列1所示的RNA或序列表中的序列3编码的RNA。

上述的重组腺病毒载体在制备具有如下1）-7）中至少一种功能的产品中的应用也是发明保护的范围：

1）预防和/或治疗肿瘤；

2）减小肿瘤数量和/或肿瘤重量；

3）抑制乙肝病毒HBsAg抗原和/或HBeAg抗原表达；

4）抑制乙肝病毒DNA拷贝；

5）抑制肝细胞的HBcAg抗原表达；

6）抑制乙肝病毒转录；具体为抑制HBV pgRNA和/或total RNA表达。

7）抑制肿瘤细胞增殖。

上述的腺病毒在制备具有如下1）-5）中至少一种功能的产品中的应用也是本发明保护的范围：

1）预防和/或治疗肿瘤；