[发明专利]人参与西洋参的特异性分子标记及其鉴别方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及中药材的鉴别方法。具体涉及人参与西洋参的特异性分子标记及其鉴别方法。

背景技术

人参（Panax ginseng C.A.Meyer）和西洋参(Panax quinquefolius L.)均为目前我国应用最广泛的重要中药材，属多年生宿根草本植物五加科（Araliaceae）人参。研究显示，人参分布于我国东北、俄罗斯远东地区及朝鲜等地；西洋参原产于北美低山地区，我国引种成功后在东北、华北、华中和康滇四大栽培区均有栽种。现有技术公开了人参和西洋参药性差异较大，但形态相似，尤其是国内栽培的人参与栽培西洋参很难根据形态特征准确鉴别，两者的粉末更是难以区别。因此市场需求一种不依赖于形态特征的鉴别人参与西洋参的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供重要中药材的鉴别方法，具体涉及人参与西洋参的特异性分子标记，及其鉴别方法，尤其是一种不依赖于形态特征的鉴别人参与西洋参的方法。

本发明提供了能够特异性识别人参与西洋参的DNA分子标记，所述的DNA分子标记分别位于Seq.No.1～5的DNA序列中的（SSR）位点上，所述的Seq.No.1，Seq.No.2，Seq.No.3，Seq.No.4和Seq.No.5DNA序列上分别具有一个简单重复序列（SSR）位点，通过该序列位点能够特异性地识别人参和西洋参；

进一步，本发明提供了基于上述DNA分子标记的快速鉴别人参与西洋参的方法，其中，根据上述序列设计5对引物，对人参和西洋参的DNA模板进行PCR扩增，每一对引物都能分别扩增出特异性识别人参和西洋参的PCR产物，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳检测这些长度不一的产物，从而快速鉴别人参与西洋参。

更具体的，本发明的快速鉴别人参与西洋参的方法，其特征在于，其包括，

1，特异性扩增人参与西洋参的简单重复序列（simple repeat sequence，简称SSR）位点的引物序列；本发明从大量含有SSR位点的人参序列中筛选出含有SSR位点的5条DNA序列，分别为Seq.No.1，Seq.No.2，Seq.No.3，Seq.No.4和Seq.No.5，这些SSR位点用于特异性地区别人参与西洋参；

2，利用上述的引物鉴别人参与西洋参：

根据上述5条人参DNA序列，设计5对多聚酶链式反应（polymerase chainreaction，简称PCR)引物，其序列分别为Seq.No.6和Seq.No.7，Seq.No.8和Seq.No.9，Seq.No.10和Seq.No.11，Seq.No.12和Seq.No.13，Seq.No.14和Seq.No.15；

用Seq.No.6+Seq.No.7对人参与西洋参的DNA模板分别进行PCR扩增，PCR退火温度52℃，结果显示，人参能产生181bp长的PCR产物，而西洋参不能产生PCR产物；

用Seq.No.8+Seq.No.9对人参与西洋参的DNA模板分别进行PCR扩增，退火温度55℃，结果显示，人参只能产生一条203bp长的PCR产物，而西洋参则能产生191bp和203bp长的两条PCR产物；

用Seq.No.10+Seq.No.11对人参与西洋参的DNA模板分别进行PCR扩增，退火温度57℃，结果显示，人参能产生一条243bp长的PCR产物，而西洋参则产生235bp长的PCR产物；

用Seq.No.12+Seq.No.13对人参与西洋参的DNA模板分别进行PCR扩增，退火温度57℃，结果显示，人参只能产生一条184bp长的PCR产物，而西洋参则能产生166bp和157bp长的两条PCR产物；

用Seq.No.14+Seq.No.15对人参与西洋参的DNA模板分别进行PCR扩增，退火温度57℃，结果显示，人参能产生251bp和273bp两条PCR产物，而西洋参则不能产生PCR产物。

本发明的实施例中，对人参与西洋参进行鉴定：

1）取待鉴定样品0.05克，用高盐低PH法提取样品的总DNA；

2）取25~50ng待检样品的DNA，从上述的5对引物中任选3对，按

各对引物特定的退火温度进行PCR扩增，每一对引物设置3次重复和空白对照；

3）聚丙烯酰胺凝胶电泳检验PCR产物的大小；

4）根据所选引物对产生的PCR产物的大小和表1所提出的标准，对样品的属性做出判断。

本发明的上述鉴定中，