[发明专利]一种检测三聚氰胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种色谱检测方法，特别涉及一种三聚氰胺的高效液相色谱检测方法。

背景技术

三聚氰胺，即1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。几乎无味，微溶于水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类。与甲醛缩合聚合可制得三聚氰胺树脂，一种热固性树脂，具有良好的耐电弧性、耐热性及耐碱性,被广泛用于塑料及涂料工业。

蛋白质中含有大量氮元素，以常用的凯氏定氮法测定产品中的蛋白质含量时，不能区分三聚氰胺和蛋白质中的氮元素，因而一些不良厂家将三聚氰胺添加到饲料和食品中，提高产品中蛋白质的检测数值，降低生产成本，牟取暴利。

现有国标检测三聚氰胺的方法是《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速检测液相色谱法》（下文简称GB/T22400）和《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（下文简称GB/T22388）。

GB/T22388中包含多种检测方法，运用高效液相色谱、液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法进行测定，结果精确度高。但检测时间通常较长，且所需设备要求较高，在一般企业内部质量控制部门进行抽样检测时，容易受到条件限制。

一般企业是按照GB/T22388第一法高效液相色谱法进行检测的，GB/T22388第一法的检测条件：流动相为离子对试剂缓冲溶液与乙腈比例为85：15(v/v)或90：10(v/v)的混合溶液，流速为1.0ml/min，仪器正常压力为1500-1600psi。流动相比例为85：15(v/v)时，保留时间16-18min；流动相比例为90：10(v/v)，保留时间29-31min。检测的全过程约需2小时，耗时长，效率低，不便于需要快速得到检测结果的情况。其主要原因在于其前处理中用到的固相萃取净化步骤耗时长，通常情况下仅固相萃取一步就需要约1小时。若是省略前处理中的固相萃取柱净化步骤，虽然可以加快检测速度，但很可能会受到杂质峰的干扰，影响定性定量分析。

为克服需要快速检测情况下GB/T22388的不足，国家质检部门又推出GB/T22400检测方法。GB/T22400检测速度快，其色谱条件为：强离子交换色谱柱，SCX，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，流速为1.5ml/min。其中色谱柱并非常用C₈、C₁₈色谱柱，且价格较常用色谱柱高，仪器正常运行情况下，柱压为2500-2600psi；高柱压下色谱柱使用寿命较短，对于需要长期大量进行原料乳中三聚氰胺检测的乳品企业而言，检测成本较高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中检测速度慢和检测成本高的缺陷，提供一种快速、结果准确的检测原料乳中三聚氰胺的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种检测三聚氰胺的方法，包括以下步骤：

（1）制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；

（2）取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤（1）相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；

（3）将步骤（2）中获得的所述样品的检测结果与步骤（1）中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量；

所述步骤（2）中的预处理包括以下步骤：称取样品（若为奶粉制品，加入纯水还原，并记录原始数据，计算稀释倍数），加入乙腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5-10min，吸取上清液过滤，收集滤液，作为高效液相色谱仪分析试样。

进一步的，上述过滤步骤用0.22μm有机相滤膜过滤。

进一步的，所述步骤（1）中高效液相色谱使用的流动相为70/30（体积比）离子对试剂缓冲溶液-乙腈。

所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。

进一步的，上述流动相超声处理30-40min，经0.22μm有机相滤膜过滤后使用，效果更佳。超声处理使流动相更加均匀，检测分析得到的结果更加稳定可靠。

进一步的，所述步骤（1）中高效液相色谱条件：流速0.8-1.0ml/min；柱温40℃；检测波长：240nm；进样量：20μL。