[发明专利]葡萄球菌肠毒素小分子抗体及制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程重组抗体，特别涉及一种葡萄球菌肠毒素小分子抗体及制备方法及用途。 

背景技术

葡萄球菌肠毒素（Staphylococcal enterotoxins，SEs）是由血浆凝固酶或耐热核酸酶阳性葡萄球菌，如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）和表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis，SE）等产生的一组单肽链可溶性胞外蛋白质毒素。该毒素家族结构相关、毒力相似，但抗原性不同，其中以金黄色葡萄球菌产生的肠毒素致病力最强，是导致食物中毒的常见重要致病因子。迄今，世界诸多国家都曾相继报道金黄色葡萄球菌的暴发流行，其中，美国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33％，加拿大则更多，占45％，而我国每年此类中毒事件则占约25%。葡萄球菌的易感染性及其肠毒素的强致病性不仅严重危害人类健康，且直接间接经济损失巨大。除引起急性胃肠炎外，葡萄球菌肠毒素还可引发毒性休克综合症（Toxic shock-like syndrome,STSS），亦与川崎疾病、银屑病等免疫疾病相关，已成为世界性卫生问题。 

葡萄球菌肠毒素为分子量较小的简单蛋白，约27.5~30.0kDa，易溶于水及盐溶液，对胃蛋白酶、胰蛋白酶等消化酶有抵抗作用，同时可耐受100℃煮沸30min而不被破坏。自从1959年葡萄球菌肠毒素被证实以来，已获得肠毒素类型共21种，根据血清学特征分类，包括早为人类发现和熟知的五种肠毒素SEA,SEB,SEC（C型又可分为C1、C2和C3三亚型）,SED,SEE和毒性休克综合症毒素I（Toxic shock syndrome toxin-1,TSST-1,既SEF）,以及近几年相继发现的SEG, SEH,SEI,SEJ,SEK,SEL,SEM,SEN,SEO,SEP，SEQ,SER,SET，SEU等多种新型肠毒素。葡萄球菌肠毒素的生物活性以催吐活性和超抗原活性为主，表现在引发类似细菌内毒素诱导的发热反应、致命性休克、增强宿主对内毒素敏感性、细胞因子分泌，以及刺激T细胞快速增殖等。研究表明，并非所有的肠毒素都具有催吐活性，其中以SEA和SED最常见，并以SEA毒力最强，摄入1μg即能引起中毒。虽然已从基因水平对传统及新型肠毒素加以区分，但关于其毒素蛋白及功能的研究甚少，尚无借鉴资料，因此广泛获得不同动物及动物性食品中葡萄球菌株，提纯天然肠毒素蛋白，可为研究葡萄球菌肠毒素检测方法及其功能活性奠定基础，对丰富其认识亦有重要意义。目前，葡萄球菌肠毒素导致食物中毒机制有待于进一步证实，从免疫机制研究，可能与其介导大量细胞因子释放而引起多器官损害有关。与此同时，作为第一个被发现的超抗原，其独特高效的诱导机体免疫机制依旧倍受关注。新生物构建技术与其固有生物特性的结合，葡萄球菌肠毒素研究及应用前景将更为广阔。 

对于葡萄球菌肠毒素蛋白的检测方法和治疗手段多基于免疫原理，但均受到传统抗体制备技术的制约，如多克隆抗体特异性差，单克隆抗体分子量大，亲和力弱，免疫原性强，应 用于人体时HMAM反应强烈等缺陷。随着分子生物学的进一步发展，抗体技术也逐步由细胞工程抗体(单克隆抗体)向基因工程抗体演替。基因工程抗体，又被称为第三代抗体，主要技术领域包括人源化抗体、小分子抗体、抗体库技术。基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强及成本低等优点。此技术的基本原理是，首先从杂交瘤或免疫脾细胞、外周血淋巴细胞等中提取mRNA，逆转录成cDNA后，经PCR分别扩增出抗体的轻链及重链可变区基因，按特定方式连接克隆到表达载体后，表达、折叠成功能抗体分子，筛选出高表达的细胞株，再用亲和层析等手段纯化抗体片段。该技术的着眼点在于尽量减少鼠源成分，保留原有抗体的亲和力和特异性，可以对完整抗体及抗体片段进行改造，且不受伦理和技术等因素的制约，发展迅速。