[发明专利]环介导等温扩增检测金鱼造血器官坏死病毒的方法及引物

说明书

技术领域

本申请涉及核酸分子检测领域，特别是涉及一种用于金鱼造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测的引物，以及基于该引物建立的非诊断目的的金鱼造血器官坏死病毒的环介导等温扩增检测方法。

背景技术

金鱼造血器官坏死病毒（Goldfish Haematopoietic Necrosis Virus，简写GFHNV）又称疱疹病毒性造血器官坏死病病毒（HerpsviralHaematopoietic Necrosis Virus，HVHNV），因该病是第二个分离自鲤科鱼类的疱疹病毒，按照国际病毒系统分类委员会的系统命名规则，正式命名为鲤科疱疹病毒-2型（Cyprinid herpescirus2,CyHV-2）。由于对该病的研究较少，缺乏相关的检疫制度，观赏金鱼的国际贸易加快了该病在世界范围内传播，给金（鲫）鱼养殖业造成破坏性影响。

环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是2000年开发的一种新颖的恒温核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件，约63℃左右，保温30－60分钟，即可完成核酸扩增。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。LAMP是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。该扩增方法的核心在于巧妙的引物设计，目前尚没有关于金鱼造血器官坏死病毒的LAMP检测方法及相关引物。

发明内容

本申请的目的是提供一种能够用于金鱼造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测的引物，以及基于该引物的试剂盒和金鱼造血器官坏死病毒的环介导等温扩增检测方法。

本申请的一方面公开了一种用于金鱼造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测的引物，该引物选自引物组1-5中的至少一组，引物组1包括Seq ID No.1所示序列的上游外部引物、Seq ID No.2所示序列的下游外部引物、Seq ID No.3所示序列的上游内部引物、Seq ID No.4所示序列的下游内部引物；引物组2包括Seq ID No.5所示序列的上游外部引物、Seq ID No.6所示序列的下游外部引物、Seq ID No.7所示序列的上游内部引物、Seq ID No.8所示序列的下游内部引物；引物组3包括Seq ID No.9所示序列的上游外部引物、Seq ID No.10所示序列的下游外部引物、Seq ID No.11所示序列的上游内部引物、Seq ID No.12所示序列的下游内部引物；引物组4包括Seq ID No.13所示序列的上游外部引物、Seq ID No.14所示序列的下游外部引物、Seq ID No.15所示序列的上游内部引物、Seq ID No.16所示序列的下游内部引物；引物组5包括Seq ID No.17所示序列的上游外部引物、Seq ID No.18所示序列的下游外部引物、Seq ID No.19所示序列的上游内部引物、Seq ID No.20所示序列的下游内部引物。

进一步的，所述引物组1还包括Seq ID No.21所示序列的上游环形引物和Seq ID No.22所示序列的下游环形引物；所述引物组2还包括Seq ID No.23所示序列的上游环形引物和Seq ID No.24所示序列的下游环形引物；所述引物组3还包括Seq ID No.25所示序列的上游环形引物和Seq ID No.26所示序列的下游环形引物；所述引物组4还包括Seq ID No.27所示序列的上游环形引物和Seq ID No.28所示序列的下游环形引物；所述引物组5还包括Seq ID No.29所示序列的上游环形引物和Seq ID No.30所示序列的下游环形引物。

本申请还公开了本申请提供的引物在金鱼造血器官坏死病毒检测中的应用。

本申请的另一面还公开了一种用于金鱼造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测的试剂盒，该试剂盒中含有本申请提供的用于金鱼造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测的引物。

进一步的，试剂盒中包括环介导等温扩增的反应液，该反应液中含有链置换型DNA聚合酶。

进一步的，反应液中含有荧光染料。

本申请还公开了本申请的试剂盒在金鱼造血器官坏死病毒检测中的应用。

本申请的再一面公开了一种金鱼造血器官坏死病毒的环介导等温扩增检测方法，该检测方法包括利用本申请提供的引物，以金鱼造血器官坏死病毒DNA为模板进行环介导等温扩增。