[发明专利]适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： 

(1)向0.5-1ml婴幼儿唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，反复吹打混匀后，8000×g离心5分钟，弃去上清，此步骤重复一次； 

(2)向步骤(1)得到的沉淀中加入500ul裂解液，彻底悬浮沉淀并充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离心管数次； 

(3)向步骤(2)得到的混合液中，加入RNA酶的水溶液10μL，37℃下静置10min； 

(4)向步骤(3)得到的上清液中，加入等体积苯氛-氯仿混合溶液，充分混匀，混合液4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； 

(5)向步骤(4)得到的上清液中加入等体积苯氛-氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； 

(6)向步骤(5)得到的上清液中加入等体积氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； 

(7)向步骤(6)得到的上清液中加入0.6倍体积的冰浴异丙醇溶液及0.1倍的醋酸钠溶液，-20℃静置60分钟后，4℃，12000×g离心10分钟，弃上清； 

(8)向步骤(7)得到的沉淀物中加入0.5mL 70％乙醇清洗沉淀物，4℃，12000×g离心5分钟，弃上清，此步骤重复一次； 

(9)步骤(8)得到的沉淀物自然风干，加入20μL无菌超纯水回溶，电泳检测，-20℃保存待用。 

2.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的婴幼儿唾液样品为5岁以下儿童的唾液、泪液、鼻涕。 

3.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述的DNA提取缓冲溶液， 溶剂为50mM的Tris-HCl pH7.4，配方中各溶剂组分中浓度为：0.5mM的EDTA、50mM的NaCl。 

4.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述的裂解液，溶剂为50mM Tris-HCl pH7.4，配方中各溶质组分浓度为：50mM Tris-HCl pH7.4，150mM NaCl，1mM EDTA，1％Triton x-100，1％Sodium deoxycholate，0.1％SDS，蛋白酶K20mg/mL。 

5.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述的RNA酶的水溶液中，RNA酶的浓度为10mg/mL。 

6.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述的苯酚-氯仿混合溶液中，苯酚和氯仿的体积比为1∶1。 

7.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述的苯酚-氯仿-异戊醇混合溶液中，苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25∶24∶1。 

8.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(6)中，所述的苯氯仿-异戊醇混合溶液中，苯氯仿和异戊醇的体积比为1∶1。 

9.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤(7)中，所述的醋酸钠的水溶液中，醋酸钠的浓度为3mol/L。