[发明专利]堪萨斯分枝杆菌检测用的引物和探针、以及使用它们检测堪萨斯分枝杆菌的方法

权利要求书

1.由任一序列号2～4所示的核酸序列或其完全互补序列组成并且与堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)基因的核酸序列杂交的寡核苷酸。

2.由任一序列号2～4所示的核酸序列或其完全互补序列组成并且与堪萨斯分枝杆菌基因的核酸序列杂交的寡核苷酸的用途，用于设计堪萨斯分枝杆菌检测用引物或探针。

3.堪萨斯分枝杆菌检测用引物，所述引物由以下寡核苷酸组成，所述寡核苷酸是由作为序列号2的部分的任一序列号13～26所示的核酸序列或其完全互补序列组成、由作为序列号3的部分的任一序列号27～40所示的核酸序列或其完全互补序列组成、由作为序列号4的部分的任一序列号41～52所示的核酸序列或其完全互补序列组成，并且与堪萨斯分枝杆菌基因的核酸序列杂交的寡核苷酸。

4.权利要求3所述的引物，其中引物是用标记物质标记的。

5.权利要求4所述的引物，其中标记物质选自放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质或生物素。

6.堪萨斯分枝杆菌检测用探针，所述探针由以下寡核苷酸组成，所述寡核苷酸是由任一序列号2～4、13～52、57～79所示的核酸序列或其完全互补序列组成，并且与堪萨斯分枝杆菌基因的核酸序列杂交的寡核苷酸。

7.权利要求6所述的探针，其中探针是用标记物质标记的。

8.权利要求7所述的探针，其中标记物质选自放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质或生物素。

9.权利要求7所述的探针，其中5’末端用报告荧光色素标记，3’末端用猝灭荧光色素标记。

10.由以下寡核苷酸组成的引物的用途，用于检测堪萨斯分枝杆菌，所述寡核苷酸是由作为序列号2的部分的任一序列号13～26所示的核酸序列或其完全互补序列组成、由作为序列号3的部分的任一序列号27～40所示的核酸序列或其完全互补序列组成、由作为序列号4的部分的任一序列号41～52所示的核酸序列或其完全互补序列组成，并且与堪萨斯分枝杆菌基因的核酸序列杂交的寡核苷酸。

11.权利要求10所述的用途，其特征是使用所述引物，以样品中的核酸作为模板进行核酸扩增反应，然后检测得到的引物延伸物。

12.权利要求11所述的用途，其特征在于包括以下步骤：

(1)使用所述引物，以样品中的核酸作为模板进行核酸扩增反应，

(2)对于(1)中得到的引物延伸物进行电泳，根据电泳结果检测堪萨斯分枝杆菌。

13.权利要求12所述的用途，其中对电泳后得到的电泳级分确认目的碱基对数的引物延伸物级分。

14.权利要求12所述的用途，对于电泳后得到的电泳级分，用标记探针进行杂交，其中所述标记探针是用标记物质标记的含有序列号2、序列号3或序列号4所示的核酸序列的部分或者全部、或其互补序列的部分或者全部并且与堪萨斯分枝杆菌基因的核酸序列杂交的寡核苷酸，通过检测该标记探针的标记，将确认与该标记探针杂交的级分判定为阳性。

15.权利要求14所述的用途，其中标记物质选自放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质或生物素。

16.权利要求10所述的用途，其中引物是用标记物质标记的，使用该引物，以样品中的核酸为模板进行聚合酶链反应，然后测定得到的引物延伸物的标记。

17.权利要求16所述的用途，其中标记物质选自放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质或生物素。

18.权利要求16所述的用途，其中在进行聚合酶链反应后，除去游离的标记引物，测定引物延伸物的标记。

19.权利要求18所述的用途，其中使经聚合酶链反应得到的反应物中的引物延伸物沉淀后，通过除去上清，除去游离的标记引物。

20.权利要求18所述的用途，其中将经聚合酶链反应得到的反应物通过凝胶层析处理除去游离的标记引物。