[发明专利]一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法

权利要求书

1.一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法，其步骤是：

（1）产α-葡萄糖苷酶菌株的发酵

①营养肉汁培养基：分别称取蛋白胨，牛肉提取物，氯化钠，加入蒸馏水，混合均匀，使氢氧化钠调整至pH7.0，1.05Kg/cm²灭菌20min；

②产酶培养基：分别称取蛋白胨，牛肉提取物，氯化钠，加入蒸馏水，混合均匀，自然pH，1.05Kg/cm²灭菌20min；

③种子液的制备：将嗜热脂肪芽孢杆菌为菌种接种营养肉汁培养基中，在40-50℃下振荡培养15-25h，初始pH5.0-7.0，装瓶量20-40ml，接种量5-20%，转速100-300 r/min；

（2）粗酶液的制备

将种子液以10%的接种量，接种于产酶培养基，在45℃下振荡培养24h，于10000r/min离心20min，去除上清液，收集沉淀，将菌体沉淀使用高压破壁，即为α-葡萄糖苷酶； 

（3）α-葡萄糖苷酶的固定化

①磁性壳聚糖微球的制备：称取纳米Fe₃O₄微球与0.01 g/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后，进行超声分散10-30min，边搅拌边缓慢加入液体石蜡和司盘-80，室温下搅拌10-30min，加入浓度为4%戊二醛溶液，在60-80℃下充分搅拌1-3 h，之后在70-90℃水浴中，熟化1-3 h，用磁铁收集得到的产物，最后依次用石油醚、丙酮、蒸馏水充分洗涤，在50-70℃下真空干燥，得到磁性壳聚糖微球；

②酶的固定化：将磁性壳聚糖微球加入三角瓶中，加入pH为7.0的磷酸-磷酸钾缓冲液，充分混合1-3h，将磁性壳聚糖微球取出，同时，将α-葡萄糖苷酶溶于pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液中，得到浓度为0.8 mg/mL的酶液，然后将磁性壳聚糖微球加入到配制好的酶液中，再加入浓度为1%的戊二醛溶液，恒温振荡1.5 h，用磁铁收集磁性固定化酶，用缓冲液充分洗涤，在4℃下保存固定化的α-葡萄糖苷酶。