[发明专利]地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用

权利要求书

1.一种地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元制备参数的优选方法，其特征是：

a、生长曲线及培养温度的确定：将活化后的地衣芽孢杆菌CICC20446菌液以容量比1%的接种量接种于已确定PH值为7.0的LB液体培养基中，于不同温度和不同转数下培养，隔0.5 h取样1次，连续培养12h，于600 nm下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制生长曲线，确定最适生长温度、转速；

b、木寡糖最适添加量的确定：将经0.22μm微孔滤器除菌后的木寡糖加入灭菌的LB液体培养基，使木寡糖的浓度分别为：0.5 mg·mL^-1、1.5 mg·mL^-1、2.5 mg·mL^-1、3 mg·mL^-1、3.5 mg·mL^-1、4 mg·mL^-1、4.5 mg·mL^-1、5 mg·mL^-1、6 mg·mL^-1、7 mg·mL^-1，将每个浓度的培养基装入容器瓶中，每个容器瓶中的液体相等；

将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量分别加入上述含不同浓度的木寡糖液体培养基中，置40℃-120 r·min^-1培养箱中振荡培养，在2.5~7.5 h内每隔0.5 h采样1次，根据600 nm波长下测定吸光度，以确定木寡糖适宜添加量；

c、地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元最适培养时间的确定：将木寡糖的最适添加量确定好后，根据测量的最适添加浓度组的OD值，利用公式计算代时G，从而根据地衣芽孢杆菌在每个时间段的代时以确定他们的最适培养时间；

G =(t2-t1)/3.322(lgx2-lgx1) 

式中：t1、t2分别代表培养时间，x1、x2分别代表不同时间合生元的OD值；

d、地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元菌液活菌数检测：利用平板菌落计数法对地衣芽孢杆菌合-木寡糖菌液活菌数进行检测。

2. 一种如权利要求1所述地衣芽孢杆菌合-木寡糖合生元制备参数的优选方法的制备工艺如下：

a、以LB液体培养基，加入木寡糖，使木寡糖的含量为2.5~4mg·mL^-1；

b、将活化后的地衣芽孢杆菌菌液以容量比 1%的接种量接种于含量为3.5~4.5 mg·mL^-1的木寡糖液体培养基中，置40℃-120 r·min^-1培养箱中振荡培养，2.5~7.5 h后取出，即得深黄色的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元产品。

3. 根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备参数的优选方法的制备工艺，其特征是：LB液体培养基中的木寡糖的最佳含量为3.5 mg·mL^-1；地衣芽孢杆菌接种于木寡糖液体培养基中在40℃-120 r·min^-1培养箱中振荡培养，最适培养时间为4 h。

4. 一种如权利要求2所述黄地衣芽孢杆菌-木寡糖合生元制备工艺生产产品的应用：每天灌喂一次，灌喂量15~20 mL。