[发明专利]一组检测尤文氏肉瘤相关基因EWSR1断裂分离的核酸探针

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤相关基因检测技术领域，更具体涉及尤文氏肉瘤(Ewing′s samoma)相关基因断裂分离检测技术领域，特别是涉及一组尤文氏肉瘤基因EWSR1断裂分离的检测探针。

背景技术

尤文氏肉瘤(Ewing′s samoma)，是骨科少见的一种恶性肿瘤，属于一种高度恶性的小圆细胞原发肿瘤。在青少年骨肿瘤发病率中占第二位。是人体骨组织第三位易发的恶性肿瘤。1921年Ewing首先描述此原发恶性骨肿瘤。当时取名为“骨的弥漫性血管内皮瘤”。其后Oberling(1928年)认为其起源于骨髓网状细胞，称之为“网状肉瘤”。但很久以来，人们对其组织发生意见不统一，文献中一直以姓氏命名。目前尤文肉瘤已被公认是一种独立的骨肿瘤，但对其来源和性质仍存在有不同的意见，如间充质细胞、成骨细胞，但大多数研究者倾向于认为尤文氏肉瘤为神经外胚层细胞起源。现在研究表明，骨外尤文氏肉瘤(extraosseous Ewing′s sarcoma，EOE)、外周原始神经外胚层瘤(pPNET)和儿童Askin′s瘤(胸壁PNET)等同属于尤文氏肿瘤家族(Ewing′s sarcoma family of tumor，ESFr)，其具有不同程度的神经外胚层分化，是一组发生于软组织的小圆细胞肉瘤，是软组织小圆细胞肿瘤的代表类型。

尤文氏肉瘤是软组织肿瘤中第一个确定具有特征性染色体异位并产生融合性基因的肿瘤。在骨外尤文氏肉瘤中存在t(11；22)(q24；q12)，产生EWSR1-FLI1融合基因，在外周原始神经外胚层瘤和发生于儿童肺部的Askin瘤中也存在相同的遗传学异常，提示这三种病变在遗传学上具有相同的基础性异常，现这三种肿瘤已统称为EWSR1/pPNET家族。

研究显示90％～95％的病例存在t(11；22)(q24；q12)，导致11q24上的FLI1基因与22q12上的EWSR1基因融合，产生EWSR1(5’端7号外显子)-FLI1(3’端，6号外显子I型，或5号外显子II型)融合性基因。EWS是一种广泛表达的功能性RNA结合蛋白。EWS基因的功能尚待阐明。FLI1基因是ETS原癌家族的一员，含有DNA结合域。正常情况下，FLI1在造血细胞中表达。在器官模型中，FLI1参与早期造血、血管和神经外胚层的发育。EWSR1-FLI1使EWSR1的N末端反式激活域与FLI1的C末端DNA结合域融合，融合蛋白起着转录促进子的作用，或者抑制靶基因，如EWSR1-FLI1负调节TGF-BII(TGFBR2)型受体，后者为一潜在的肿瘤抑制基因产物。TGFBR2受到抑制，可使瘤细胞能够避免凋亡。

在软组织肿瘤中，有些肿瘤在细胞形态学上和EWSR1/pPNET家族有相似的小圆细胞，常常容易导致误诊。如转移性神经母细胞瘤、分化差的腺泡状横纹肌肉瘤、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤等。检测EWSR1基因的断裂分离可以排除这些肿瘤的干扰，准确鉴别、诊断尤文氏肉瘤(SalvatoreRomeo&AngeloP.DeiTos，Soft tissue tumors associated with EWSR1 translocation，Virchows Arch(2010)456：219-234 DOI 10.1007/s00428-009-0854-3.)。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测EWSR1基因断裂分离的核酸探针组合。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种用于诊断尤文肉瘤EWSR1基因断裂分离的探针组合，该组合为BAC克隆片段CTD-2260D14，CTD-2050C22，CTD-3036O13，RP11-155B12。其中CTD-2260D14，CTD-2050C22定位于EWSR1基因着丝粒一侧，核酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，标记相同的任意一种颜色的荧光，如标记绿色荧光；CTD-3036O13，RP11-155B12定位于EWSR1基因端粒一侧，核酸序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，标记相同但与着丝粒一侧标记不同颜色的荧光，如标记红色荧光；标记的荧光颜色可以互换。

使用该探针组合检测EWSR1基因断裂分离的步骤如下：

(a)样本预处理：将组织切片样本在二甲苯中脱蜡5分钟，再重复1次。然后在95％、85％和70％乙醇中各水化2次，每次5分钟。