[发明专利]一种纳米磁微粒的重悬方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种纳米磁微粒的重悬方法。

背景技术

磁性分离技术是以纳米或微粒级的磁性微粒为载体，利用结合于磁性微粒表面的蛋白质所提供的特异的亲和特性，在加磁场的定向控制下，通过亲和吸附、清洗、解吸操作，可以进一步从复杂的生物体系中分离到目标物分子，具有磁性分离简单方便、亲和吸附高特异性及高敏感性等众多优点。应用于磁性分离技术的磁性载体应具备以下特点：①粒径比较小，比表面积较大，具有较大的吸附容量；②物理和化学性能稳定，有较高机械强度，使用寿命长；③含有可活化的反应基团，以用于亲和配基的固定化；④粒径均一，能形成单分散体系；⑤悬浮性好，便于反应的有效进行。

纳米技术的出现，促进了磁性微粒的应用。纳米磁微粒粒径小，加至反应液中呈悬浮状态，加磁场后可迅速分离。纳米磁微粒还可通过免疫反应与标记有荧光素、化学发光物质、酶等物质连接，建立各种免疫分析方法。

纳米磁微粒化学发光免疫诊断试剂综合采用了目前国际上的两大主流免疫分析尖端技术——悬浮纳米磁微粒载体技术、化学发光检测技术，能够准确定量的检测人类血清中的免疫抗原或抗体，可用于过敏、自身免疫、甲状腺功能、肿瘤、性激素、传染病等相关标志物的检测。然而，纳米磁微粒包被抗体或抗原后，保存的过程中容易发生集聚现象，形成直径在几微米到几百微米大小的团簇，甚至肉眼可见聚集块，导致纳米磁微粒应用到试剂中，试剂的灵敏度降低。

因此，实有必要开发一种纳米磁微粒的重悬方法，以解决其包被抗体后保存过程中产生集聚现象造成应用时试剂灵敏度低的问题，该方法是纳米磁微粒化学发光免疫诊断试剂生产和发展的核心技术之一。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种纳米磁微粒的重悬方法，以解决纳米磁微粒包被抗体或抗原后保存过程中产生集聚现象造成应用时灵敏度低的问题。

为了达到上述目的，本发明提供一种纳米磁微粒的重悬方法，其特征在于：取纳米磁微粒的悬浮液置于容器内并将该容器置于冰水浴中，采用超声波破碎机对纳米磁微粒进行超声重悬。

较佳地，所述超声重悬的工艺参数为：超声功率50~500W，超声时间1～10分钟。

相较于现有技术，采用本发明提供的纳米磁微粒的重悬方法对表面包被有抗体或抗原的纳米磁微粒的悬浮液进行重悬后，再将其应用到纳米磁微粒化学发光免疫诊断试剂中，试剂的灵敏度有较大提高。

附图说明

图1为对比例中PSA试剂的灵敏度评价拟合曲线。

图2为本发明实施例一中PSA试剂的灵敏度评价拟合曲线。

图3为本发明实施例二中PSA试剂的灵敏度评价拟合曲线。

图4为本发明实施例三中PSA试剂的灵敏度评价拟合曲线。

具体实施方式

在以下对比例和实施例中，均通过采用前列腺特异性抗原单克隆抗体包被的纳米磁微粒化学发光测试试剂（PSA试剂）对“O”浓度的待测血清样本进行检测，并通过计算和拟合曲线进行灵敏度评价。

材料与仪器：

前列腺特异性抗原单克隆抗体包被的纳米磁微粒化学发光测试试剂（PSA试剂），所述试剂中的纳米磁微粒的悬浮液为包被有PSA的纳米磁微粒（即PSA纳米磁微粒）的悬浮液；Magl i a60化学发光免疫分析仪，市售；JY92-II超声波破碎机，购自宁波新芝生物科技股份有限公司。

其中，所述的前列腺特异性抗原单克隆抗体包被的纳米磁微粒化学发光测试试剂包括：

该PSA试剂包括含有荧光素（F I TC）标记的PSA抗体的溶液（简称第一试剂）和包被有荧光素抗体的磁微粒的悬浮液（简称磁分离试剂），碱性磷酸酶（ALP）标记的PSA抗体的溶液（简称第二试剂）。

所述的PSA试剂通过以下方法制备得到：

第一试剂的制备

（1）材料与仪器：以磷酸盐缓冲液保存的PSA抗体（纯度超过95wt%，浓度为1mg/ml）；异硫氰酸荧光素（FITC），碳酸氢钠等试剂应达到化学纯；G-25凝胶纯化柱采购自GE公司。

（2）制备步骤：

①用0.2mol/L pH9.0的碳酸盐缓冲液配制0.5mg/ml的FITC溶液；

②按照PSA抗体与FITC分子比为1:20的比例在抗体溶液中加入步骤①所配FITC溶液，混合均匀，室温静置12h小时，反应生成PSA抗体-FITC连接物；

③将经过步骤②的反应液通过G-25凝胶柱进行分离，除去未反应的FITC，得到含有PSA抗体-FITC连接物（即FITC标记的PSA抗体）的溶液；