[发明专利]一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，属于禽类遗传育种技术领域。

背景技术

胆固醇是动物细胞各种膜相结构及神经髓鞘的重要组成部分，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能。但是机体如果摄入大量的胆固醇会导致血液中其含量明显升高，而这正是引起冠状动脉硬化、脑血栓等心血管疾病发生的重要因素之一。美国心脏研究协会早在上世纪70年代初推荐每天胆固醇摄入量应低于300毫克。膳食胆固醇来源于动物性食物，而鸡蛋是动物性食品中胆固醇含量较高的一种。研究表明，鸡蛋中的胆固醇是影响人血浆中总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-CHOL）水平的重要因素。从改善人们的饮食和健康、提高养殖水平的角度考虑，降低鸡蛋中胆固醇含量具有非常重要的意义。目前降低鸡蛋中胆固醇的方法主要有两种：一是通过常规育种途径选择低蛋黄胆固醇含量的蛋鸡新品系；二是通过饲料营养调控，即采用在饲粮中添加一些营养性、非营养性的添加剂或降脂药物等。但是采用常规育种技术，由于历经时期长，育种进展缓慢，费力、费资金；采用饲料营养调控的方式，虽效果明显但其中的添加剂或药物残留问题以及对生产性能和环境卫生的影响也不容忽视。因此，解决蛋黄胆固醇含量高的问题，最根本的途径还是通过现代的分子育种技术培育低蛋黄胆固醇含量蛋鸡新品系。

发明内容

本发明的目的是提供一种历时短、成本低、安全的低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种低蛋黄胆固醇含量蛋鸡的培育方法，包括以下步骤：

1）提取样本鸡DNA，以包含鸡VLDLR基因的DNA序列为模板，设计一对引物，利用PCR-RFLP方法进行样本鸡个体基因分型；PCR-RFLP酶切片段是一个片段，片段大小为293bp，命名为TT型；PCR-RFLP酶切片段是两个片段，片段大小分别为214bp和79bp，命名为CC型；PCR-RFLP酶切片段是三个片段，片段大小分别为293bp、214bp和79bp，命名为CT型；

2）利用基因效应分析模型，将不同基因型与样本鸡个体蛋黄胆固醇含量及全蛋胆固醇含量进行关联分析，比较不同基因型的蛋黄胆固醇含量，确定选留基因型；

3）将符合选留基因型的公母鸡个体组建家系，繁殖下一代；

4）提取选留家系鸡后代的DNA，以步骤1）中的一对引物进行PCR-RFLP分析，选留其中为步骤2）中选留基因型的鸡；

5）重复步骤3）和4）继代选育至少三代，得到低蛋黄胆固醇含量蛋鸡。

所述引物为：

正向引物：5'-CTCGCTGAGGCTCGTGTT-3′；

反向引物：5'-GAAATGGTATGCCGAAGT-3′。

所述PCR反应体系为：超纯水3.5μL，10pmol/μL的上游引物0.5μL，10pmol/μL的下游引物0.5μL，50ng/μL DNA模板0.5μL，2×Taq Master Mix5.0μL，反应总体积10μL。

所述PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃充分延伸10min，4℃保存，其中变性、退火、延伸共30个循环。

所述PCR-RFLP酶切体系为：Eco72I内切酶0.3μL，10×PCR Buffer2μL，PCR产物10μL，超纯水7.7μL，反应总体积20μL。

所述基因效应分析模型：Y=μ+G+E，其中：Y为蛋品质测定的观察值；μ为群体平均值；G为基因型固定效应；E为随机误差。

所述选留基因型为TT型。

所述步骤3）的具体方法为：采用闭锁群选育法进行纯系选育，组建家系50个，公母比例1:10，个体笼饲养至40周龄，记录每只母鸡的产蛋数，40周龄时的平均蛋重和蛋黄胆固醇含量，计算50个家系全部母鸡和每个家系母鸡的产蛋数、蛋重和蛋黄胆固醇含量3个性状的均值；以蛋黄胆固醇含量为主选性状，兼顾蛋重和产蛋数，选留蛋黄胆固醇含量低于50个家系全部母鸡均值，蛋重和产蛋量高于50个家系全部母鸡均值的前15个家系，繁殖下一代。

本发明采用VLDLR基因分子标记辅助选择育种方法，缩短世代间隔、提高选种准确性、减少育种群饲养量、降低饲养成本。本发明方法培育出的蛋鸡具有良好的生产性能和鸡蛋品质，其蛋黄胆固醇含量可比原有水平降低20%以上，符合消费者对于鸡蛋消费的健康要求。

附图说明

图1为鸡基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图；