[发明专利]一种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用

权利要求书

1.一种诊断癌症或评价癌症风险的酶联免疫吸附试剂盒，其包含：钙网蛋白（CRT）的特异性抗体，所述特异性抗体为通过以钙网蛋白为免疫原得到的单克隆抗体和/或多克隆抗体。

2.权利要求1所述的试剂盒，其中所述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，其制备方法如下：使用纯化的钙网蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫；经效价检测达标后，进行细胞融合；经筛选克隆获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，经杂交瘤细胞株分泌，得单克隆抗体。

3.权利要求1所述的试剂盒，其中：所述多克隆抗体为兔源多克隆抗体。

4.权利要求1-3任一所述的试剂盒，其还包含：酶标抗体，包被有所述单克隆抗体的微孔板，HRP标记的羊抗兔酶标抗体，标准阳性对照钙网蛋白，标准阴性对照大肠杆菌BL-21菌体蛋白，封闭液，样品稀释液，洗涤液，终止液，底物显色液。

5.权利要求4所述的试剂盒，其中所述的封闭液，样品稀释液，洗涤液，终止液，底物显色液的组分及配比如下：

1)封闭液由1％BSA液和1％山羊血清液组成，山羊血清在封闭时加入，使之浓度为封闭液的1％即可；

2)样品稀释液为1×PBS；

3)洗涤液为含浓度为0.05％Tween-20的PBS；

4)终止液为2M的硫酸；

5)底物显色液包括A液和B液，A液的制备过程为：过氧化脲1g，磷酸氢二钠35.8g，柠檬酸10.2g，Tween-20100μl，将前三者加ddH₂O避光溶解后加入Tween-20定容至1L，4℃避光保存；B液的制备过程为TMB0.7g，柠檬酸10.3g，DMSO40ml，先用DMSO避光溶解前两者后加ddH₂O定容至1L，4℃避光保存；使用前等体积混合A液和B液，避光显色。

6.权利要求1-5任一所述的试剂盒，其中所述癌症为肺癌。