[发明专利]一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种家蚕浓核病毒LAMP可视化快速检测试剂盒，其特征在于，包括一对内侧引物DFI1/ DBI1和一对外侧引物DF1/ DB1，引物序列如SEQ ID NO:1~4所示。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含基因组DNA抽提缓冲液、LAMP反应液、阳性对照品、阴性对照品显色液；

所述LAMP反应液除含有权利要求1所述引物还含有2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA 聚合酶、密封液和无菌水。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述2×LAMP反应缓冲液含有20 mM Tris-HCl，pH8.8；10 mM KCl；2 mM MgSO₄；20 mM（NH₄）₂SO₄；0.1% Triton X-100；2.8 mM dNTPs；1M甜菜碱；25mM MgCl₂。

4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述DNA抽提缓冲液含有10 mM Tris-Cl，pH8. 0；0. 1 M EDTA，pH 8. 0；0. 5% SDS（十二烷基硫酸钠）。

5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为BmDNV模板DNA或含BmDNV靶基因DNA片段的质粒、阴性对照品为正常家蚕组织模板DNA。

6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述显色液为SYBR Green I 、EvaGreen或钙黄绿素。

7.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系为：

2×LAMP反应缓冲液                    12.5μL；

DFI1/ DBI1（40pmol/μL）               1μL；

DF1/ DB1(5 pmol/μL)                   0.5μL；

Bst DNA 聚合酶（8U/μL）              1μL；

模板DNA                              2μL；

无菌水                                 8.0μL。

8.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的LAMP反应条件为60~65℃恒温反应20~90 min；然后 80~100℃，1~10 min灭活。

9.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述密封液为甘油。

10.一种用权利要求1至9任一项所述试剂盒检测家蚕浓核病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样品DNA；

S2.在反应管中配置反应体系；

S3.向反应体系中加入密封液，在反应管盖内侧加入显色液；

S4.反应：将反应管60~65℃恒温放置20~90 min；然后 80~100℃，放置1~10 min灭活；

S5.结果判读：将显色液与反应产物混合；观察颜色变化，反应产物颜色变为绿色，说明待测样品含有家蚕浓核病毒；反应产物变为橙色，则不含有家蚕浓核病毒。