[发明专利]尿微量白蛋白检测方法、系统和试剂盒

权利要求书

1.一种检测溶液中尿微量白蛋白浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）用pH5.0～8.2的含有钾离子或钠离子的缓冲溶液、尿微量白蛋白和菁染料配制尿微量白蛋白浓度不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的菁染料；

（2）将所述多个溶液样本置于荧光光谱仪下，采用540至570nm的激发波长，检测采集波长处的荧光强度值；

（3）以各个所述溶液样本的尿微量白蛋白浓度作为横坐标或纵坐标，以步骤（2）中测得的各溶液样本在采集波长处的荧光强度值为纵坐标或横坐标作图，从而获得尿微量白蛋白浓度的标准曲线；

（4）在待测液体样品中加入菁染料、含有钾离子或钠离子的缓冲溶液，以使待测液体样品中的菁染料的浓度以及pH值与步骤（1）中的溶液样本一致，从而得到测试溶液，并记录待测液体样品被稀释的比例；

（5）将步骤（4）中获得的测试溶液置于荧光光谱仪下，采用与步骤（2）相同的激发波长，检测所述采集波长处的荧光强度值；

（6）利用步骤（5）中测得荧光强度值在步骤（3）中获得的尿微量白蛋白浓度标准曲线中找到对应的测试溶液的尿微量白蛋白浓度值，然后通过待测样品被的稀释比例计算出待测样品的尿微量白蛋白浓度；

其中所述采集波长在550nm至650nm的范围。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述菁染料为式I的化合物，

          式I

其中：R₁为C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自H或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃与它们所连接的碳原子一起形成5元至7元的环结构，或者R₄和R₅与它们所连接的碳原子一起形成5元至7元的环结构；R₆和R₇为C₁-C₆烷基或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y为反离子，根据R₆和R₇所带电荷的不同而不同，若R₆和R₇为烷基，则Y为卤素阴离子；若R₆和R₇只有一个带有磺酸根，则无需Y作为反离子；若R₆和R₇均带有磺酸根，则Y为三乙胺阳离子；X₁，X₂独立地选自C、O、S、Se或Te。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述C₁-C₆的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基或异己基。

4.如权利要求2所述的方法，其中R1选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基或异己基。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述5元至7元环结构为含有或不含有N或S原子的饱和或不饱和环结构。

6.如权利要求2所述的方法，其中Y选自氟、氯、溴、碘阴离子或三乙胺阳离子。

7.如权利要求2所述的方法，其中所述含有钾离子或钠离子的缓冲液选自添加有水溶性钾盐或钠盐的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、巴比妥钾-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、磷酸钠缓冲液；所述缓冲液中缓冲剂的浓度在1～50mmol/L范围。