[发明专利]一种RNA及其在心血管系统疾病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种RNA及其在心血管系统疾病中的应用。

背景技术

HIP-55(hematopoietic progenitor kinase 1[HPK1]-interacting protein of 55 kDa；也称为drebrin-like protein、mAbp1或SH3P7)是一个包含多功能域的蛋白质。其结构主要包含着N端的F-actin蛋白结合结构域和C端SH3结构域。HIP-55参与突触发生、受体内吞、骨架重排及信号转导。目前对HIP-55功能了解较少尚无对HIP-55在心血管系统方面的研究报道。

心血管疾病是中国居民健康的“头号杀手”，每年主要用于心血管病的直接医疗费用已达1300亿元人民币。心肌纤维化是心脏重塑的重要病理改变，是指在心肌的正常组织结构中心肌成纤维细胞过度分裂，胶原纤维过量积聚、心脏组织中胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变，引起心肌僵硬度增加、舒缩功能受限，严重影响心脏的功能。这种病理变化在多种心血管疾病中存在，与心律失常、心功能障碍甚至心脏性猝死密切相关。心肌纤维化是心功能由代偿期向失代偿期转变的关键，其严重程度和疾病的发生发展及预后密切相关。因此，预防和逆转心肌纤维化具有重要的意义。大量研究表明儿茶酚胺-肾上腺素系统过度激活是促心肌纤维化的重要因素，儿茶酚胺（如异丙肾上腺素isoproteronol,Iso)通过β-ARs促进心肌成纤维细胞增殖和胶原合成增加，从而导致心肌纤维化、心脏功能的恶化和心衰的形成。同时β-ARs阻滞剂能够显著改善患者的预后。

发明内容

本发明的目的是提供一种RNA及其在心血管系统疾病中的应用。

本发明提供的RNA，其核苷酸序列为序列表中序列3。

编码上述RNA的基因也是本发明保护的范围。

上述RNA的基因的核苷酸序列为序列表中序列4。

含有上述基因的重组载体、转基因细胞系或重组腺病毒也是本发明保护的范围。

上述重组载体为重组腺病毒载体；所述重组腺病毒载体具体为将上述的基因导入腺病毒载体中，得到表达RNA的重组腺病毒载体。

上述腺病毒载体为pAd/PL-Dest，上述重组腺病毒载体具体为将编码上述RNA的基因（序列4）插入pAd/PL-Dest中得到的载体，将该质粒命名为shpAd-HIP-55

HIP-55蛋白抑制剂在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用也是本发明保护的范围：

1）促进心脏成纤维细胞增殖；

2）提高P38MAPK激酶活性；

所述HIP-55蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。

上述促进心脏成纤维细胞增殖具体通过如下1）或2）体现：

1）在ISO诱导下增加心脏成纤维细胞Brdu参入量；

2）在ISO诱导增加心脏成纤维细胞CCK8吸光值。

上述提高P38MAPK激酶（为两种亚型，其氨基酸序列为序列表中的序列8或序列9）活性通过提高P38MAPK激酶底物ATF-2的磷酸化水平。

上述应用中，所述HIP-55蛋白抑制剂为上述RNA、上述基因或上述重组载体、转基因细胞系或重组腺病毒。

上述应用中，所述产品为药物。

上述应用中，所述心脏成纤维细胞为离体心脏成纤维细胞。

HIP-55蛋白在筛选、开发和/或设计具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用也是本发明保护的范围：1）抑制心脏成纤维细胞增殖；2）抑制P38MAPK激酶活性；所述HIP-55蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。

本发明的实验证明，本发明发现经异丙肾上腺素（ISO）诱导，在乳大鼠心肌成纤维细胞中过表达HIP-55明显抑制心脏成纤维细胞增殖，与之相反，应用RNAi方法knock down HIP-55明显促进心脏成纤维细胞增殖；在过表达HIP-55心脏成纤维细胞中能够抑制ISO诱导的P38MAPK的激活以及激酶活性，而在Knock-down HIP-55心肌成纤维细胞中能够增强ISO诱导的P38MAPK的激活以及激酶活性；发现HIP-55是一种新的对心脏纤维化具有保护作用的蛋白质，为临床诊断、治疗及新药开发提供了新的靶点。

附图说明

图1为过表达HIP-55蛋白质表达水平的检测

A为携带Dserd-HIP-55基因腺病毒及携带Dserd基因的对照腺病毒转染效率的检测；B为过表达HIP-55蛋白质表达水平的检测