[发明专利]一种具有抗骨质疏松症作用的鱼卵糖蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物活性物质筛选应用技术领域，具体涉及一种鱼卵糖蛋白肽的制备方法和在骨质疏松症预防和治疗方面的应用。

背景技术

我国是世界第一水产大国，养殖和海水捕捞鱼类总产量达2990万吨。鱼类加工过程中约产生30-50%包括鱼卵在内的副产物，目前除少量优质鱼卵被用来加工鱼子酱或经初加工食用外，大部分与其它副产物一起用于生产鱼粉等低附加值产品。研究表明，鱼卵不但营养丰富，而且富含多不饱和脂肪酸、DHA/EPA-磷脂、卵磷脂、糖蛋白等多种功效成分。对鱼卵功效成分的研究和开发，主要集中在功能性脂质部分。鱼卵蛋白是鱼卵的主要成分，主要含有卵黄脂磷蛋白、卵黄高磷蛋白和β组分（不含磷和脂的小分子蛋白），具有糖蛋白特性，且大多数种类的鱼卵糖蛋白中含有唾液酸。目前有关鱼卵糖蛋白的研究主要集中在发育生物学和生态毒理学基础研究方面，鱼卵蛋白的高值化加工尚未引起关注。

鸡蛋卵黄蛋白的组成与鱼卵的相似（Eur Food Res Technol,2002,214:460–464），除了含有高磷蛋白，还富含唾液酸糖蛋白（J. carbohydr. chem. 1995, 14(6):833–841；Biochimica et Biophysica Acta.1997, 1335: 23–32）。日本学者报道了脱脂鸡蛋卵黄蛋白酶解物具有显著促进成骨细胞增殖和分化，抑制破骨细胞生长，增加胫骨的骨密度和密质骨厚度，抑制股骨的松质骨丢失，改善骨结构。而磷酸化蛋白则无此作用（Biosci. Biotechnol Biochem, 2007, 71(5):1327–1329；Biosci. Biotechnol. Biochem. 2008, 72 (7):1929–1931；The Journal of The North American Menopause Society, 2010,18(3):1–7）；JP 2005-21087A；JP W02006/075558A1）。日本公开的专利（JP 2011-211979A）中进一步证明了唾液酸糖肽具有促进成骨细胞职增殖和分化的作用。鸡蛋卵黄糖蛋白肽在日本已成为开发防治骨质疏松症食品或药品的新资源。

有关鱼卵蛋白抗骨质疏松症的研究，经专利和非专利检索，共检索到有2项专利。其中日本专利JP 2011-42636A公开了鳕鱼卵蛋白酶解物与Ca²⁺结合形成的水溶性络合物，可显著促进小肠的Ca²⁺吸收，可作为促进钙吸收的添加剂开发和应用。该专利主要是利用了鳕鱼卵蛋白酶解物中的高磷蛋白磷酸肽与Ca²⁺络合，没有涉及含有唾液酸的糖蛋白肽的应用。公开号为CN 101019916A的专利公开了将鲑鱼卵脱脂后，利用完整鱼卵中的天然雌二醇和大豆异黄酮配伍用于围绝经期妇女骨质疏松症和更年期综合症的防治。但尚未见鱼卵糖蛋白肽防治骨质疏松症的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鱼卵糖蛋白肽的制备方法，及其在制备预防和治疗骨质疏松症的保健食品、功能食品或药品中的应用。以填补鱼卵糖蛋白开发和利用的上述不足，开拓鱼卵高值化加工的新途径。

本发明的具有抗骨质疏松症作用的鱼卵糖蛋白肽的制备方法，其特征在于：首先将鱼卵冷冻干燥后，用乙醇进行脱脂处理；然后将脱脂处理过的鱼卵冷冻干燥，再加入蛋白酶进行水解，水解结束后，将水解液的pH值调为中性，将水解液离心后的上清液超滤、脱盐后，浓缩、干燥得到鱼卵糖蛋白。

上述的蛋白酶为中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶中的任一种或几种。

上述的蛋白酶，优选为中性蛋白酶和碱性蛋白酶的复合酶，其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶的质量比为1:1

上述方法中的水解条件如下：在40-60℃下水解1-8h。

上述的鱼卵为淡水鱼或海水鱼卵；其中一种为鲫鱼卵和鳕鱼卵

所述的上清液超滤是指经截留分子量为10KD的超滤膜超滤。

本发明制备的鱼卵糖蛋白肽在制备抗骨质疏松症的保健食品、功能食品或药品中的应用。

本发明所用的原料丰富易得，所述方法能够完好的保持鱼卵糖蛋白中唾液酸的结构，工艺步骤简单，设备投资少、无环境污染，适于工业化生产。所得产品具有很强的抗骨质疏松症活性。可用于开发安全有效地预防或治疗抗骨质疏松症的食品或药品。

附图说明

图1：本发明制得的含有唾液酸的脱脂鱼卵蛋白DAD/FLD串联HPLC图谱；