[发明专利]一种用热激蛋白90基因检测昆虫产卵量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用热激蛋白90基因检测昆虫产卵量的方法。

背景技术

害虫生物防治在农林业可持续发展中发挥着不可替代的重要作用。天敌昆虫的大量生产更是生物防治中最基础也是最重要的环节。捕食性天敌昆虫蠋蝽（Armachinensis）可以控制来自鳞翅目、鞘翅目、半翅目、同翅目、膜翅目等多种农林害虫，尤其是它还可以控制重大外来入侵害虫马铃薯甲虫和美国白蛾，因此蠋蝽是一种应用前景很好的天敌昆虫商品。

作为商品，大量减少生产成本是人们追求利润最大化的一个途径。在天敌昆虫蠋蝽生产中就可以应用不同的食物来生产蠋蝽，例如，不同的昆虫猎物、含昆虫成分的人工饲料和不含昆虫成分的人工饲料，进而减少生产成本。但是应用不同的食物生产出来的蠋蝽的生物学特性参差不齐，有些释放后能达到很好的控制害虫的作用，有的则在释放后效果不显著。由于不同食物饲喂的蠋蝽在表型上很难区分，因此这些天敌昆虫在释放前是很难评估它们的生物学特性的。

蠋蝽成虫的产卵量是评价天敌昆虫生物学特性的一个很重要的指标。有较高产卵量的蠋蝽种群繁殖快，倍增时间短，可以在短期内迅速控制住害虫。这可以大大减少防治害虫的成本，增加利润率。相反，产卵量较低的蠋蝽由于繁殖慢，倍增时间延长，因此控制住害虫的时间会相对滞后，这就大大增加了防治成本，减少了利润。目前，对于不同食物来源或不同商家的商品蠋蝽产卵量的检测方法仍旧是在整个成虫期或人为规定的时间内测试其产卵量的多少，这种方法费时费力费钱。因此需要一种快速检测天敌昆虫商品生物学特性-产卵量的方法。

在昆虫体内，热激蛋白90(heatshockprotein90)参与由孕酮介导的卵母细胞的成熟。

发明内容

本发明的一个目的是提供用于检测热激蛋白90编码基因表达量的物质的用途。

本发明提供了用于检测热激蛋白90编码基因表达量的物质在检测昆虫产卵量中的应用；

所述热激蛋白90的氨基酸序列为序列表中的序列2。

上述应用中，所述昆虫为昆虫个体或昆虫种群；

所述昆虫种群具体为取食不同物质昆虫种群；所述取食不同物质昆虫种群进一步具体为取食人工饲料的昆虫种群或取食猎物的昆虫种群；

所述热激蛋白90编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列1或序列表中的序列1自5’末端第2-331位核苷酸。

所述昆虫具体为蠋蝽。

上述人工饲料按照如下方法制备：生猪肝60g、大豆粉10g、水100ml、鸡蛋20ml、干酪素2g、蔗糖8g、VC0.2g、氯化胆碱0.4g、泛酸钙8mg、叶酸0.1mg、烟酰胺0.2mg、庆大霉素3.9mg；具体饲喂方法见实施例2；

上述猎物为柞蚕（Antheraea pernyi）蛹；具体饲喂方法见实施例2。

上述应用中，所述用于检测热激蛋白90编码基因表达量的物质为如下1）-3）中任意一种：

1）引物对A：所述引物对由引物1和引物2组成；所述引物1的核苷酸序列为序列表中序列3；所述引物2的核苷酸序列为序列表中序列4；

2）含有所述引物对A的RT-PCR试剂；

3）含有所述引物对A或所述RT-PCR试剂的试剂盒。

本发明的另一个目的是提供一种引物对A。

本发明提供的引物对A，由引物1和引物2组成；

所述引物1的核苷酸序列为序列表中序列3；所述引物2的核苷酸序列为序列表中序列4。

含有上述的引物对A的RT-PCR试剂也是本发明保护的范围；上述RT-PCR试剂具体由水、RT-PCR扩增缓冲液、镁离子、dNTPs、上述的引物对A、荧光染料（SYBR GreenI）和Taq酶组成；

所述引物对A中的各条引物在所述RT-PCR试剂中的终浓度具体为0.2-1μM，所述引物对A中的各条引物在所述RT-PCR试剂中的终浓度进一步具体为0.25μM。

含有上述的引物对A或上述的RT-PCR试剂的试剂盒也是本发明保护的范围。

上述试剂盒还包括内参引物对B，所述内参引物对B由引物3和引物4组成；所述引物3的核苷酸序列为序列表中的序列6；所述引物4的核苷酸序列为序列表中的序列7。

本发明的第三个目的是提供一种检测昆虫产卵量的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：用上述的引物对A或上述的RT-PCR试剂或上述的试剂盒对待测的昆虫A和B进行RT-PCR扩增；