[发明专利]一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒，包括超纯水，X溶液，10×PCR缓冲液，PCR引物，25mM氯化镁溶液，DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下5个与华法林用药相关基因上的7个SNP位点上的不同基因型的正反向扩增引物、DNA内参的正反向扩增引物及反应内参的正反向扩增引物，其基因序列如下表所示：

2.根据权利要求1所述的一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒，其特征在于：所述的X溶液为包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA；反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向扩增引物带荧光标记。

3.根据权利要求1所述的一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒，其特征在于：所述的阳性对照品为为上述5个与华法林用药相关基因上的7个SNP位点上的不同基因型的引物克隆所得DNA片段。

4.一种利用权利要求1-3中任一项所述的指导华法林用药的多重基因检测试剂盒的检测方法，其特征在于具体包括以下步骤：

（1）采集样本并提取核酸

采集肿瘤患者口腔拭子或血液样品的分离培养物，从分离培养物中提取核酸；

（2）以提取的核酸为模板进行PCR反应

取DNA样品2μL，10×PCR缓冲液2μL，25mM的氯化镁3.4μL，PCR引物溶液2μL，DNA聚合酶0.6μL，X溶液2μL，超纯水10μL混匀后加入到96孔样品板上进行PCR反应，反应条件：95°C2分钟；94°C30秒钟，55°C30秒钟，70°C1分钟，循环35次；70°C1分钟；4°C直至收取PCR产物；其中所述的X溶液为包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA；反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向扩增引物带荧光标记；PCR引物溶液中各PCR引物浓度均为200nM，所述的PCR引物包括以下5个与华法林用药相关基因上的7个SNP位点上的不同基因型的正反向扩增引物、DNA内参的正反向扩增引物及反应内参的正反向扩增引物，基因序列如序列表中SEQ ID NO.1～NO.32所示；

（4）GeXP遗传分析仪毛细电泳分离样品

取PCR产物0.1-1μL，Beckman GeXP系统配套的上样缓冲液38.75μL，DNA Marker0.5μL，矿物油一滴混合均匀后加入到96孔分离液板上进行毛细电泳分离样品，将GeXP遗传分析仪的软件获得的图谱与标准图谱对比，获得指导华法林用药相关基因的SNP位点的等位基因型。