[发明专利]快速聚合番茄黄化曲叶病毒病多个抗性基因的引物及方法

权利要求书

1.一种快速聚合番茄黄化曲叶病毒病多个抗性基因的引物，其特征在于，包括三对引物，即引物对Ty2-caps, Ty3- caps和Ty4-scar，其中：

Ty2-caps正向引物Seq ID No.1 Ty2-caps-F : 5'- AGC TGA TGA aca cct cgt gac atC -3';     

Ty2-caps反向引物Seq ID No.2 Ty2-caps-R: 5' CTC GCG CCA AGT CAA TTG CTT GG- 3'；

Ty3-caps正向引物Seq ID No.3 Ty3-caps-F: 5'- AGT CTG GTG GTG AAT AGG CAT CA -3'；

Ty3-caps反向引物Seq ID No.4 Seq ID No.4 Ty3-caps-R: 5' TTA GTA CCC CAA GGG AAC AAG AGT- 3'；

Ty4-scar正向引物Seq ID No.5 Ty4-scar-F：5'- GCG GAC TTG GAT GAT GAC ACG GCC TG -3'; 

Ty4-scar反向引物Seq ID No.6 Ty4-scar-R: 5' GCT CAC TTT GCA AAT CAC ATC CCC ATC - 3'。

2.一种利用如权利要求1所述的引物快速聚合番茄黄化曲叶病毒病多个抗性基因的方法，其特征在于，其步骤包括：

（1）将分别携有黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-2、Ty-3或Ty-4抗性基因的番茄植株进行杂交，获得F1代杂交种，并进行多代自交，获得不同世代的自交系；

（2）利用所述的三对引物对各自杂交系进行筛选，获得纯合Ty2/Ty2、 Ty-3/ Ty-3与Ty-4/ Ty-4基因，并具有稳定抗黄化曲叶病毒病的番茄自交系。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所获得的番茄自交系至少包括Ty-2、Ty-3与Ty-4 黄化曲叶病抗性等位基因。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，利用引物对Seq ID No.1 Ty2-caps-F与Seq ID No.2 Ty2-caps-R对自交系是否含有纯合Ty2/Ty2基因进行鉴定，鉴定方法为：

（1）提取各单株幼苗总DNA，利用引物对Seq ID No.1 Ty2-caps-F 与Seq ID No.2 Ty2-caps-R进行PCR扩增；

（2）对PCR产物进行RsaI限制性内切酶进行酶切，利用琼脂糖凝胶电泳，若只有一条425 bp DNA片段, 则该单株幼苗中含有纯合Ty2/Ty2基因。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，利用引物对Seq ID No.3 Ty3-caps-F 与Seq ID No.4 Ty3-caps-R对自交系是否含有纯合Ty3/Ty3基因进行鉴定，鉴定方法为：

（1）提取番茄单株幼苗总DNA，利用引物对Seq ID No.3 Ty3-caps-F 与Seq ID No.4 Ty3-caps-R进行PCR扩增；

（2）对PCR产物进行TaqI酶切，利用琼脂糖凝胶电泳，若有两条条带，则该单株中含有纯合的黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-3/Ty-3。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，利用引物对Seq ID No.5 Ty4-scar-F 与Seq ID No.6 Ty4-scar-R对自交系是否含有纯合Ty4/Ty4基因进行鉴定，鉴定方法为：

（1）提取番茄单株幼苗总DNA，利用引物对Seq ID No.5 Ty4-scar-F与Seq ID No.6 Ty4-scar-R进行PCR扩增；

（2）利用琼脂糖凝胶电泳, 若有一条600 bp的条带，则该单株中含有纯合的黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-4/Ty-4。